分光光度計,又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。
物理意義
當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時, 其吸光度 A 與吸光物質的濃度 c 及吸收層厚度 ι 成正比,而透光度 T 與 c、ι 成反比,即,A = lg(1/T) =k * ι* c → c = A / (k * ι)
這就是光吸收的基本原理Beer-Lambert’s law 比爾—朗伯定律
其中,
• A 為吸光度
• T 為透射比(透光度)是出射光強度(lt)比入射光強度(l0)
• k 為摩爾吸收系數,它與吸收物質的性質及入射光的波 長 λ 有關
• c 為吸光物質的濃度,單位為 mol/L
• ι為吸收層厚度,一般以 cm 單位
VWR 推出mySPEC 系列多功能分光光度計,適用于微量核酸和蛋白質樣本的濃度和純度測定。
mySPEC Twin 系列具有一個額外的比色皿端口,可用于測量細胞密度或酶活性。預設測定程序,針對不同應用,實現快速、完整的自動數據分析。
應用包括RNA和DNA的濃度和純度測定、蛋白質測量(A280,Bradford, Lowry,BCA,Pierce 660 法)、標記效率測定、比色法測定酶活性和細胞密度測量。
工作原理
mySPEC 技術
通過靜電形成液柱,起始最長光程路徑(1 mm)。將下光纖表面移動靠近上光纖表面,形成較短光程(最短可達0.05 mm):通過靜電拉開樣品,然后進行擠壓。
1. 使用mySPEC移液器將1 µl樣品直接滴到下光纖表面上
2. 閉合取樣臂
3. 形成樣品液柱,調節最佳光程,然后開始測量。由于具有“自動開始”功能,無需按“測量”。幾秒內即可顯示測量結果,可輕松保存為文檔或進行打印
4. 只需簡單擦拭光纖表面,即可進行下一次測量
產品優勢
利用分光光度計通用mySPEC系列,用戶可以對極少樣品量中的所含的核酸和蛋白質進行量。Twin系列擁有額外的比色皿用端口,以便進行細胞密度或酶活性測量。預配置模組可對一系列應用進行快速、全自動數據分析,包括RNA和DNA濃度和純度,蛋白測量(A280, Bradford, Lowry, BCA, Pierce 660),標簽效率測定,酶活性比色測定和細胞密度測量。
• 只需1 µl樣品
• 操作簡單,無需比色皿,只需移液器即可測量(<5秒),然后擦掉
• 測量范圍從2 ng/µl到15 µg/µl(ds DNA),避免易于出錯的稀釋和計算
• Twin系列結合微量和比色皿功能,可對樣品進行溫度控制(30-40 °C)和攪拌
(0/50/1000每分鐘)
• 獨立式8.4英寸觸摸屏版本可選
• 用戶定義純度設置后可自動進行數據分析
最小加樣量
mySPEC 超微量紫外可見光分光光度計可用于微量體積的濃度和純度測定,針對不同樣品,其最小加樣量不同。
核酸:1 μl
高濃度核酸:1,3 - 2 μl
蛋白:2 μl
Bradford、BCA、Lowry或Protein Pierce 660 nm試劑:2 μl
微生物細胞懸浮液:2 μl
測試結果對比
我們采用mySPEC和某品牌的同類產品對6份不同濃度的dsDNA樣品進行了測定,得到以下數據,
通過對比后我們發現:
• 兩種儀器的測量結果相同
• mySPEC的測量結果具有更為出色的再現性(標準偏差小)
結果表明:mySPEC的測量精確度更高。如此看來,這款分光光度計真的很skr!
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