產品名稱：核酸純化柱(RNA專用)

產品貨號：N1012

產品批次：20140703

產品信息：

收集管 聚丙烯，2mL

吸附柱 聚丙烯，0.75mL

墊片 聚乙烯

濾膜 硅膠膜

DNase/RNase 無

核酸吸附量 ≥10ug

RNA 提取檢測 合格

RNA 純度（水） 1.5-1.9

實驗室使用進口原料配制而成的功能型科研專用試劑，擁有專業技術老師負責售前，售后技術指導，大量現貨，當天發貨。歡迎咨詢~

核酸純化柱由：收集管、吸附柱、墊片、濾膜四部分組成。

索萊寶供應的核酸純化柱收集管材質為聚丙烯，體積是2mL

吸附柱材質為聚丙烯，容積是0.75mL

墊片材質：聚乙烯

濾膜材質：硅膠膜

DNase/RNase含量： 無

核酸吸附量（載量） ≥10ug

離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。  

常規用途：

1）質粒小量提取試劑盒說明書

貨號：D1100

規格：50T/100T

保存：常溫保存，復檢期一年。

試劑盒內容：

產品說明：

本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

操作步驟:

1、取1-5ml細菌培養物，12000rpm離心1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋渦振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。

3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細菌基因組DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過5 min，以免質粒受到破壞。

4、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀。12000rpm離心10 min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室溫放置2min，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心1min。

10、為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心1min。

注意事項:

1、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁，如有混濁現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。

2、洗脫緩沖液體積不應少于50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)，pH值低于7. 0會降低洗脫效率，DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。

3、 如果所提質粒為低拷貝質�；虼笥�10kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用5-10ml過夜培養物，同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增加提取效率。

4、DNA濃度及純度檢測：得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD₂₆₀處有顯著吸收峰，OD₂₆₀值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。

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