StarMut Site-directed Mutagenesis Kit采用反向PCR (Inverse PCR) 技術，對含有目標基因的雙鏈環狀質粒進行擴增，直接導入突變序列，從而實現單個或多個鄰近堿基的置換(substitution)、缺失(deletion)或插入(insertion)。該技術的原理如圖所示。首先以甲基化的質粒DNA為模板，使用人工合成含有目的突變堿基的引物進行擴增反應，然后用DpnI限制性內切酶消化不含突變的質粒模板，再進行轉化和篩選。
本試劑盒使用的StarMut Enzyme及其配套buffer能夠最大限度地保持擴增質粒的保真性，對引物設計的要求相對寬松、靈活，最多可實現21個連續堿基的插入或刪除，適用于≤6 kb質粒的點突變。該方法操作簡單快捷，突變陽性率高，嚴格按說明書操作，6個以下連續堿基的突變率可達90%以上。

  StarMut Site-directed Mutagenesis Kit的原理和操作流程示意圖

用途
• 6 kb以下質粒的單個或多個鄰近堿基的置換（Substitution）、缺失（Deletion）、或插入（Insertion）

特點
• 操作簡單：采用一步PCR法，不需要磷酸化引物，不需要連接反應，不需要特殊菌株
• 陽性率高：6個以下連續堿基的突變率可達90%以上
• 質控對照：提供Control Plasmid和Control Primers，通過X-gal瓊脂平板呈色變化監控反應各組分的性能
• 提供針對高GC模板的High-GC Additive

產品組分
StarMut Enzyme                                                            8 μl
10 x StarMut Reaction Buffer                                  100 μl
High-GC Additive                                                        30 μl
StarMut dNTPs                                                            25 μl
Dpn I（10 U/μl）                                                        12 μl
Control Plasmid（5 ng/μl）                                     10 μl
Control Primers（10 μM of each）                         10 μl
ddH2O                                                                           1 ml

保存條件
-20℃恒溫保存一年，感受態細胞于-80℃保存，有效期6個月

使用方法
1．設置PCR反應體系：
       Template Plasmid（5~10 ng/μl）                              1 μl
       10 x StarMut Reaction Buffer                                     2.5 μl
       Primer Mixture（10 μM of each）                                1 μl
       StarMut dNTPs                                                                2 μl
       ddH2O                                                                補足至25 μl
2．加入 0.5 μl StarMut Enzyme混勻，置于PCR儀中
3．按以下設置進行PCR：
       

4．加入1 μl Dpn I，37℃溫育1 hr
5．轉化、培養