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StarMut 基因定點突變試劑盒
英文名稱：StarMut Multi Site-directed Mutagenesis Kit總訪問：467
國產(chǎn)/進口：國產(chǎn)半年訪問：12
產(chǎn)地/品牌：GenStar產(chǎn)品類別：分子生物學(xué)試劑
規(guī)       格：T114-01 最后更新：2015-8-31
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定點突變是一種廣泛應(yīng)用的分析蛋白和DNA的非常有力的工具。普通的定點突變試劑盒通常是基于反向PCR技術(shù)，采用高保真耐熱DNA聚合酶和互補的突變引物向目的基因引入單個堿基或多個鄰近堿基的突變、缺失、或插入。當(dāng)遇到多個位點突變的需求時，利用單點突變試劑盒只能對目標(biāo)位點逐一引入突變，耗時費力。


StarMut Multi Site-directed Mutagenesis （MSDM）Kit突破了傳統(tǒng)的定點突變方法，只需要一步PCR反應(yīng)，即可引入多個目標(biāo)突變，操作簡單快捷，突變陽性率高。該試劑盒針對單個目標(biāo)突變只采用一條磷酸化的突變引物，利用StarMut MSDM Enzyme的耐熱DNA聚合酶活性合成與模板互補的帶有突變的的DNA鏈，然后通過該酶的連接酶活性修復(fù)突變DNA鏈之間的缺刻（nicks），使其連接成為一條與模板互補的突變單鏈DNA。經(jīng)過多個PCR循環(huán)反應(yīng)后，帶有多個特定突變的DNA鏈成倍增長，經(jīng)過DpnI限制性內(nèi)切酶消化不含突變的質(zhì)粒模板，環(huán)化的單鏈突變DNA可直接進行轉(zhuǎn)化，通過DNA測序或限制性內(nèi)切酶消化等方法篩選出目標(biāo)突變質(zhì)粒。本試劑盒適用于≤6 kb質(zhì)粒的多點突變，根據(jù)質(zhì)粒性質(zhì)不同，最多可引入5個獨立位點的突變、插入或刪除。

 

用途
·  研究突變對蛋白功能或結(jié)構(gòu)的影響
·  蛋白藥物、基因工程酶的定向進化
 
特點
·  高效快速：采用一步PCR法，同時引入多個突變位點
·  操作簡便：不需要磷酸化引物，不需單獨的連接反應(yīng)，不需要特殊菌株
 
產(chǎn)品組分
StarMut MSDM Enzyme                                                        8 μl
10 x StarMut MSDM Buffer                                                  100 μl
StarMut dNTPs                                                                    25 μl
Dpn I (10 U/ml)                                                                    12 μl
ddH2O                                                                                 1 ml
 
保存條件
-20℃恒溫保存一年
 
使用方法
1． 設(shè)置PCR反應(yīng)體系：
Template Plasmid (5~10 ng/μl)                                        1 μl
10x StarMut MSDM Buffer                                            2.5 μl
Phosphorylated primers (20 μM)                                      2 μl
StarMut dNTPs                                                              1 μl
ddH2O                                                               補足至25 μl
2． 加入 1 μl StarMut MSDM Enzyme混勻，置于PCR儀中
3． 按以下設(shè)置進行PCR：
4． 加入1 μl Dpn I，37℃溫育≥1 hr
5． 轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)
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