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microRNA Isolation Kit——分離miRNA或靶mRNA
microRNA(miRNA)雖然只有22個左右的堿基，但是在基因表達調控中起著至關重要的作用，參與細胞分化、個體發育，且與多種疾病相關。因此對于miRNA的研究越來越多。傳統的miRNA分離方法是結合了基于酚/胍的樣品裂解和硅膠膜離心柱，直接將總RNA分離出來，不能直接分離出miRNA。
Wako的miRNA純化試劑盒能夠制備高純度的miRNA片段，在細胞中，成熟的miRNA分子可與Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默復合體(RISC)，此純化試劑盒利用免疫沉淀方法，與Ago蛋白結合抗體的特異性，分離miRNA。純化的miRNA片段含有非常少的rRNA和tRNA降解片段。與傳統的miRNA純化方法相比，有效提高了miRNA的克隆效率。純化的miRNA可用于分析miRNA的靶mRNA。
n 特點
1) 內源性Ago蛋白的免疫沉淀
2) 高度純化與Ago蛋白結合的miRNA
3) 其他RNAs的污染少，比如rRNA & tRNA
4) 純化的microRNA片段可用于高效的microRNA克隆和微陣列
5) 可同時分離miRNA和靶mRNA，便于直接進行后續的靶mRNA的克隆和定量分析
與常規方法比較
| 常規方法 | Wako的新方法 | |
| 總RNA提取 | 需要 | 不需要 |
| 小RNA (≦200nt)的純化 | ||
| 變性PAGE電泳 | ||
| 從變性PAGE凝膠中進行凝膠抽提 | ||
| 從變性PAGE膠中進行凝膠純化 | ||
| rRNA片段污染率 | 高 | 低 |
| tRNA片段污染率 | 高 | 低 |
| 操作時間 | ≦12小時 |
≦4小時 |
使用例1：
圖1：使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2純化microRNA片段
從培養的人類細胞系（HeLa,HepG2,HEK293）中純化的microRNA片段用Urea-PAGE和銀染方法（Wako Cat. No. 311-03961；CLEAR STAIN Ag）檢測。每個細胞系的數目大約是5×106。上樣量是用該試劑盒純化后獲得的5ul microRNA溶液（制備的溶液一般是10ul）。
siRNA藥理研究
將小分子干擾RNA（siRNA）直接注入細胞中，這些siRNA結合蛋白元件，也可形成RISC，此試劑盒也可純化與Ago2結合的siRNA，便于后續的siRNA研究分析。因此此試劑盒不僅能分離miRNA，亦可作用于siRNA，大大拓寬了試劑盒的使用范圍。
后續研究：
1）RNAi的抑制效果
2）siRNA的藥代過程
3）體內siRNA的穩定性
4）毒性/副作用
5）對于非特異性mRNAs的脫靶效應
貨號 品名 規格
291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 10tests
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests
290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 200units
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 500units
298-67901 PCR Purification Kit 30tests
298-68001 Target mRNA Cloning Kit 10tests
圖1：使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2純化microRNA片段
從培養的人類細胞系（HeLa,HepG2,HEK293）中純化的microRNA片段用Urea-PAGE和銀染方法（Wako Cat. No. 311-03961；CLEAR STAIN Ag）檢測。每個細胞系的數目大約是5×106。上樣量是用該試劑盒純化后獲得的5ul microRNA溶液（制備的溶液一般是10ul）。
siRNA藥理研究
將小分子干擾RNA（siRNA）直接注入細胞中，這些siRNA結合蛋白元件，也可形成RISC，此試劑盒也可純化與Ago2結合的siRNA，便于后續的siRNA研究分析。因此此試劑盒不僅能分離miRNA，亦可作用于siRNA，大大拓寬了試劑盒的使用范圍。
后續研究：
1）RNAi的抑制效果
2）siRNA的藥代過程
3）體內siRNA的穩定性
4）毒性/副作用
5）對于非特異性mRNAs的脫靶效應
貨號 品名 規格
291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 10tests
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests
290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 200units
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution 500units
298-67901 PCR Purification Kit 30tests
298-68001 Target mRNA Cloning Kit 10tests
手機版：分離miRNA或靶mRNA用
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