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小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14產品概述：
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細胞名稱 |
MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14） |
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種屬 |
小鼠 |
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年齡（性別） |
新生 |
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組織來源 |
顱頂骨 |
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生長特性 |
貼壁 |
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細胞形態(tài) |
成纖維細胞樣 |
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背景描述 |
從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆，從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗壞血酸和3-4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化，不形成ECM，可以作為MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的陰性對照。礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨鈣素(OCN)和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產出相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關轉錄因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細胞只是產生纖維組織。這些細胞系是研究體外成骨細胞分化的好模型，尤其是ECM信號。它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細胞的行為類似。 |
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生長培養(yǎng)基 |
MEMα＋10% FBS＋1% P/S |
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培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14操作說明：
1)對于常溫運輸的細胞，收到細胞后，檢查是否有運輸問題，即細胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精消毒后，保留封口膜，放入細胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴格檢查培養(yǎng)箱的參數：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開始后續(xù)操作。選用正確的細胞培養(yǎng)體系，A2780(人卵巢癌細胞)嚴格按照說明書的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內做細胞拍照記錄，通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。
2)對于干冰運輸的細胞，請取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14注意事項：
1)細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。
2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當的提高培養(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度。
3)對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現細胞分布明顯不均時（即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14下面介紹幾種細胞培養(yǎng)過程中常見的污染：
一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入抗生素可以減少此種污染，但也不是絕對的。
二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數情況下是培養(yǎng)用血清。
三)念珠菌污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。
四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。
EC490 HASMEC 人主動脈平滑肌細胞 人 DMEM 貼壁
EC492 H8 人宮頸上皮永生化細胞 人 1640 貼壁
EC493 BEAS-2B 人正常肺上皮細胞 人 DMEM 貼壁
EC854 MDA-MB-361 人乳腺癌細胞 人 EMEM 貼壁
EC1324 AU-565 人乳腺癌細胞 人 1640 貼壁
EC1324 UAECEC-812 人乳腺導管瘤細胞 人 DMEM 貼壁
EC494 FHs 74 Int 人小腸正常細胞 人 1640 貼壁
EC498 HEL 92.1.7 人白血病細胞系 人 1640 懸浮
EC694 Karpas-299 人間變性大細胞 人 IMDM 懸浮
EC586 OVISE 人卵巢癌細胞 人 1640 貼壁
EC499 NECI-H1792 人肺癌腺癌細胞 人 1640 貼壁
EC960 NECI-H358 人非小細胞肺癌細胞 人 1640 貼壁
EC500 TECam-2 睪丸精原細胞瘤細胞 人 DMEM 貼壁
N1E-115 小鼠神經母細胞 小鼠 無
EC779 LL-PK1 豬腎細胞 人 DMEM 貼壁
