轉基因大豆GTS40-3-2品系基因定性檢測試劑盒產品說明書(中文版)

主要用途

YIJI轉基因大豆GTS40-3-2品系基因定性檢測試劑是一種旨在根據品系特異性轉基因分子標志和內源性保守序列設計引物，針對種子、食品、飼料等樣本DNA進行PCR擴增，獲得特異性條帶，來識別或定性鑒定其轉基因大豆成分的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。可以被用于各種種子、食品、飼料等大豆品系GTS-40-3-2的鑒定。可用于后續測序、載體克隆等實驗。產品即到即用，性能穩定，操作簡便，擴增特異。

技術背景

轉基因農產品（genetically modified organism；GMO）成為食品安全的重要問題，標記和監測作為市場準入的法律依據。目前至少有40多種轉基因農作物作為食品使用，其中大豆（soybean）是常見品種之一。由美國孟山都（Monsanto）公司開發的品系GTS-40-3-2，1996年進入市場，其商標名稱為RoundReady Soybean（RRS），已經有100多種品種（varieties）。品系GTS-40-3-2由花椰菜花葉病毒（cauliflower mosaic virus）35S啟動子（promoter）、矮牽牛（Petunia hybrida）的葉綠體轉運肽（chloroplast transit peptide；CTP）基因和葉綠體轉運肽4前導序列（leader sequence）、抗草甘膦（glyphosate）基因5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶基因（5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase；EPSPS）、根癌農桿菌（Agrobacterium tumefaciens） 胭脂氨酸合酶（nopaline synthase；NOS）轉錄終止子等外源性基因元素構成，通過PV-GMGT04載體轉化到大豆品種A5403而成。其中CT4 EPSPS基因，（1365堿基，編碼456氨基酸），作為功能性抗草甘膦基因，是品系GTS-40-3-2的分子標記。通過CT4 EPSPS基因交界片段和大豆內源性凝集素（lectin）基因的引物設計，擴增其特異產物，進行識別、定性、定量鑒定種子、食品、飼料等轉基因大豆成分。 

產品內容

YIJI擴增液（Reagent A）  900微升

YIJI品系引物液（Reagent B）  40微升

YIJI補充液（Reagent C）  1毫升

YIJI大豆引物液（Reagent D）  40微升

產品說明書  1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

PCR級礦物油：用于封隔反應液

PCR儀：用于樣品擴增

PCR管或平板：用于PCR反應的容器

瓊脂糖凝膠電泳：用于擴增后電泳分析

實驗步驟

實驗開始前，從－20℃冰箱中取出試劑，放進冰槽里融化。然后進行下列操作：

• 針對一個樣本，每次移出15微升YIJI擴增液（Reagent A）到PCR管
• 加入1微升用戶自備的的待測DNA樣品（總量100至200納克）
• 加入2微升YIJI品系引物液（Reagent B）或YIJI大豆引物液（Reagent D）
• 再加入7微升YIJI補充液（Reagent C）（反應總量為25微升）
• 即刻放進微型臺式離心機瞬時離心5秒，速度為500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）
• （選擇步驟）加入50微升用戶自備的PCR級礦物油（注意：參見注意事項9）
• 即刻進行熱啟動PCR反應：

• 反應完畢后，移取5微升進行1.8%瓊脂糖凝膠電泳：  

• 如果繼續測序鑒定，膠回收PCR產物（建議使用YIJI高質純化膠回收試劑盒；YJ20007.2）
• 進行后續的測序反應

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 建議使用帶濾芯的槍頭，避免污染
• 在－20℃冰箱里儲存的產品避免反復凍融
• 出現大豆擴增條帶：證明為大豆或含有大豆的樣品
• 出現品系擴增條帶：證明為GTS-40-3-2轉基因大豆或含有轉基因成分的樣品
• 可以將擴增產物純化后，克隆到質粒中，然后進行測序
• 如果需要測序，可以訂購測序引物
• 根據用戶PCR儀的性能，決定是否加入礦物油（Mineral Oil）
• 本公司提供系列轉基因生物分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶污染
• 本產品經鑒定檢測特異

使用承諾

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。