正苯基萘胺攝入法細菌膜損傷熒光檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

正苯基萘胺攝入法細菌膜損傷熒光檢測試劑是一種旨在通過使用疏水熒光染料正苯基萘胺，與膜磷脂成分結合，產生強烈藍色熒光，作為檢測信號來測定細菌細胞膜損傷程度的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心改良、成功實驗證明的。適用于革蘭氏陰性和陽性細菌的膜完整性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，熒光清晰。

技術背景

正苯基萘胺（1-N-phenyl-naphtylamine；NPN）是一種疏水性（hydrophobic）熒光探針，在磷脂環境下，而不是在水相環境下，產生強烈藍色熒光。完整的細菌細胞外膜對正苯基萘胺發生排斥，一旦膜遭到損害，正苯基萘胺可以進入膜磷脂層，而顯示熒光增強現象，其產生的藍色熒光基團的吸收峰是355nm，而散射峰是460nm，成為一種常用的熒光檢測信號，以此來評價細菌膜損傷程度。  

產品內容

HENDAIL緩沖液（Reagent A）       毫升

HENDAIL染色液（Reagent B）     微升

產品說明書                         1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，HENDAIL染色液（Reagent B）避免光照，有效保證6月

用戶自備

微型臺式離心機：用于細菌沉淀收集

1.5毫升離心管：用于樣品處理的容器

比色皿或96孔板：用于樣品熒光檢測的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于細菌染色后分析

實驗步驟

實驗開始前，開啟熒光分光光度儀預熱，設定激發波長355nm，散發波長460nm。然后進行下列操作：

• 移取1毫升細菌培養瓶里的新鮮菌液（OD₆₀₀＝0.50）到新的1.5毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g （或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升HENDAIL緩沖液（Reagent A），充分混勻
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g （或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 重復實驗步驟4至6一次
• 加入xx毫升HENDAIL緩沖液（Reagent A），充分混勻
• 小心移取150微升菌液到比色皿或96孔板的樣品孔里
• 加入45微升用戶自備的藥物
• 加入xx微升HENDAIL染色液（Reagent B），混勻
• 置于25℃溫度下孵育5分鐘
• 即刻放進熒光分光光度儀或熒光酶標儀：激發波長355nm，散發波長460nm
• 獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit）
• 構建損傷曲線：縱座標（Y軸）為相對熒光單位；橫座標（X軸）為藥物濃度
• 或比較不同細菌的膜損傷程度

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 樣品須使用HENDAIL緩沖液（Reagent A）清理處理
• 用戶自備的藥物，避免使用鹽類溶液配制
• 通常樣品染色后2至5分鐘趨于飽和  
• 建議細菌染色后即刻進行熒光分析
• 本公司提供系列細菌分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定熒光清晰