植物葉片葉綠體粗提分離試劑盒（中文版）

主要用途

 植物葉片葉綠體粗提分離試劑是一種旨在通過物理破壁和化學(xué)破膜及離心處理方法，從植物葉片組織中分離出完整而純化的葉綠體細(xì)胞器的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于菠菜、豌豆、萵苣、卷心菜、甜菜、煙草等各種新鮮植物葉片（leaf）組織，同時(shí)也適用于植物 谷粒（grain）、種子（seed）等葉綠體成分的分離。用于高等植物不育性、葉綠體功能和活性、遺傳等研究。 產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定，無(wú)核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。 

技術(shù)背景

葉綠體（chloroplast）是綠色植物進(jìn)行光合作用和能量轉(zhuǎn)化的重要細(xì)胞器。葉綠體是細(xì)胞質(zhì)中的一種色素體，因含葉綠素而成綠色。葉綠體由外被（envelope）、類囊體（thylakoid）和基質(zhì)（stroma）組成。葉綠體DNA是一種閉合環(huán)狀雙股結(jié)構(gòu)，含有10至30個(gè)基因，編碼200個(gè)蛋白質(zhì)。  

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI 清理液（Reagent A）   毫升

YIJI 裂解液（Reagent B）   毫升

YIJI 凈化液（Reagent C）   毫升

YIJI 強(qiáng)化液（Reagent D）   毫升

YIJI 保存液（Reagent E）   毫升

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存YIJI 凈化液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于保存葉綠體樣品

尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)：用于去除植物裂解殘?jiān)?/p>

小型漏斗：用于過濾的裝置

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞

渦旋震蕩儀：用于混勻

實(shí)驗(yàn)步驟

• 物理勻漿法

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的YIJI 凈化液（Reagent C）凍融，然后移出xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）和xx毫升的YIJI 裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標(biāo)記為YIJI 裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備好新鮮的植物葉片組織，并秤重以確定1克組織重量 
• （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI 清理液（Reagent A）清洗1次
• 用刀片切碎組織（注意：建議去除葉莖）
• 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
• 加入預(yù)冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
• 置于冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）（注意：參見注意事項(xiàng)9）
• （選擇步驟）準(zhǔn)備1個(gè)小型漏斗，內(nèi)襯尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)，置于50毫升錐形離心管上
• （選擇步驟）將所有組織勻漿液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4層紗布替代）
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為200g
• 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管（如果跳過過濾步驟或上清液含有肉眼可見的殘?jiān)�，重�?fù)離心5分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細(xì)胞壁殘?jiān)�、�?xì)胞核和未溶解的細(xì)胞 
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒群
• （選擇步驟）進(jìn)行葉綠素定量測(cè)定（建議使用YIJI 植物葉綠體總蛋白定量檢測(cè)試劑盒－YJ 16009）
• 即刻移入1.5毫升離心管，放進(jìn)－70℃冰箱里保存

• 化學(xué)處理法

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的YIJI 凈化液（Reagent C）凍融，然后移出xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）和xx毫升的YIJI 裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標(biāo)記為YIJI 裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1克組織重量 
• （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI 清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個(gè)液氮凍存管
• 即刻放進(jìn)液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管
• 加入預(yù)冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
• 加入預(yù)冷的xx微升YIJI 強(qiáng)化液（Reagent D）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項(xiàng)10）
• 加入預(yù)冷的xx毫升YIJI 保存液（Reagent E），輕輕搖動(dòng)試管混勻
• （選擇步驟）準(zhǔn)備1個(gè)小型漏斗，內(nèi)襯尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)，置于50毫升錐形離心管上
• （選擇步驟）將所有組織裂解液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4層紗布替代）
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為200g
• 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管（如果如果跳過過濾步驟或上清液含有肉眼可見的殘?jiān)�，重�?fù)離心5分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細(xì)胞壁殘?jiān)�、�?xì)胞核和未溶解的細(xì)胞
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒群
• （選擇步驟）進(jìn)行葉綠素定量測(cè)定（建議使用YIJI 植物葉綠體總蛋白定量檢測(cè)試劑盒－YJ16009）
• 即刻移入1.5毫升離心管，放進(jìn)－70℃冰箱里保存

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次操作（1克植物葉片組織）
• 建議使用新鮮植物樣品，暗室4℃冰箱里過夜
• 植物樣品務(wù)必避光，以防止淀粉聚集
• 葉綠體操作均須在4℃或以下狀態(tài)下進(jìn)行
• 操作時(shí)，須無(wú)菌操作，避免污染母液，尤其是YIJI 裂解液（Reagent B）和YIJI 保存液（Reagent E）
• 建議使用足夠的組織量
• 建議植物組織使用物理法組織勻漿器操作為首選；德國(guó)的BRAUN細(xì)胞勻漿器最為理想
• 建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間
• 通常勻化次數(shù)為80下（或組織塊狀消失為止）達(dá)到80％的組織細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的組織細(xì)胞裂解程度：完整組織細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加勻化次數(shù)
• 通常孵育5分鐘達(dá)到80％的組織細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的組織細(xì)胞裂解程度：完整組織細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)
• 本公司提供系列植物葉綠體分析技術(shù)產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的葉綠體內(nèi)外膜完整
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的葉綠體維持正常活性

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承諾

上海一基秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。