植物總核糖體分離試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

植物總核糖體分離試劑是一種旨在通過物理破壁和化學破膜以及等密度超速離心處理方法，從植物組織中分離出完整而純化的總核糖體組分的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種新鮮或凍存的植物葉片（leaf）、谷粒（grain）、種子（seed）等組織總核糖體成分的分離。產品即到即用，操作簡易，性能穩(wěn)定，無核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產量皆高。 

技術背景

核糖體（ribosome）是一種細小顆粒的核糖蛋白復合物（ribonucleoprotein complex），生命細胞制造蛋白質的非膜性結構元素和轉譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質組成，具有多肽轉移酶的活性。其分成2個亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過大亞體結合轉運核糖體（tRNA），而小亞體結合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個蛋白組成；而40S由18S RNA和33個蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個蛋白；30S包括16S RNA和21個蛋白。   

產品內容

清理液（Reagent A）    毫升

裂解液（Reagent B）    毫升

分離液（Reagent C）    毫升

保存液（Reagent D）    毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存GENMED裂解液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器

尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)：用于去除植物裂解殘渣

小型漏斗：用于過濾的裝置

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

超速離心機：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細胞

渦旋震蕩儀：用于混勻

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進行下列操作。

• 準備好新鮮或凍存的植物組織（葉片、種子、根尖等），并秤重以確定1至2克組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器
• 置于冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）（注意：未見組織塊）
• 準備1個小型漏斗，內襯尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)，置于50毫升錐形離心管上
• 將所有組織勻漿液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4層紗布替代）
• 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為10000g
• 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管 
• 放進－70℃冰箱里備用或放進冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
• 移取xx毫升分離液（Reagent C）到8毫升超速離心管
• 小心沿著管壁，在分離液（Reagent C）上面，一滴一滴加入5毫升上述獲得的核糖體組分 （注意：避免晃動，同時離心前，使用礦物油填滿離心管）
• 小心放進4℃超速離心機離心16小時，速度為180000g
• 小心取出離心管 
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升保存液（Reagent D），混勻顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為20000g
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
• （選擇步驟）進行核糖體定量測定 
• 放進－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準備后續(xù)操作

注意事項

• 本產品為10次操作（1至2克植物組織/次）
• 建議使用新鮮植物樣品為佳
• 植物樣品務必避光，以防止淀粉聚集
• 樣品操作均須在4℃或以下狀態(tài)下進行
• 操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是分離液（Reagent C） 
• 建議使用足夠的組織量
• 核糖體定量計算公式（微克/微升）： A260 ¸ 11.1或（皮摩爾/毫升）：A260 X 19
• 用戶可以使用Biuret法或OD值進行定量
• 如果進行核糖體蛋白萃取，建議使用純化核糖體蛋白質萃取試劑盒
• 本公司提供系列植物核糖體分析技術產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定分離的核糖體維持正�；钚�
• 本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶