植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑是一種旨在通過顯色染料茚三酮與游離氨基酸的氨基發生反應，在熱處理下，產生藍色復合物，由分光光度儀比色分析，定量檢測樣品中游離氨基酸含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心設計、成功實驗證明的。適用于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）等裂解懸液樣品的游離氨基酸含量檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測準確。

 

技術背景

 

氨基酸（amino acid或α-amino acid）是一種含有胺和羧基功能基團的分子，為生物體中最必須的元素。根據其側鏈的不同，分成四類（弱酸、弱堿、極性、非極性）和20種各種不同的氨基酸；根據其光學異構體（optical isomers），又分成L型和D型。L-氨基酸是構成蛋白質的主要結構分子。氨基酸是多肽、蛋白質和輔酶等的組成單位，具有各種代謝作用和營養價值。基于游離氨基酸的游離氨基與茚三酮（ninhydrin）反應，產生中間產物酮酸（keto acid）和氨分子，進而在熱處理下，進行脫羧基過程（僅發生于游離氨基酸），同時產生藍色復合物，在分光光度儀（570nm波長）下，呈現吸光峰值的變化，來定量分析游離氨基酸的總含量。其反應系統如下：

產品內容

 

YIJI清理液（Reagent A） 毫升

YIJI萃取液（Reagent B）               毫升

YIJI緩沖液（Reagent C） 毫升

YIJI反應液（Reagent D） 毫升

YIJI標準液（Reagent E） 微升

產品說明書               1份

 

保存方式

保存YIJI萃取液（Reagent B）和YIJI標準液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI反應液（Reagent D）具有揮發性，嚴格密閉瓶蓋，避免光照；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于標準液配制和樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

干式恒溫儀：用于反應孵育

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織

微型臺式離心機：用于樣品操作

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度儀：用于比色分析

實驗步驟

 

一、樣品準備

 

• 準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1克組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI萃取液（Reagent B）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）
• 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管，放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預冷的1.5毫升離心管
• （選擇步驟）如果上清液含有肉眼可見的殘渣，重復離心5分鐘一次，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
• 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－YJ30030.1）
• 放進－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用

 

二、標準樣品配制

 

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent C）到1至5號管
• 移取xx微升YIJI標準液（Reagent E）到1號管，混勻
• 小心移取xx微升1號管稀釋的YIJI標準液（Reagent E）到2號管，混勻
• 小心移取xx微升2號管稀釋的YIJI標準液（Reagent E）到3號管，混勻
• 小心移取xx微升3號管稀釋的YIJI標準液（Reagent E）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽里備用；標準管濃度見下表

 

管號	YIJI緩沖液（Reagent C）	YIJI標準液（Reagent E）	標準氨基酸濃度
1	xx微升	xx微升	xx微摩爾/升
2	xx微升	xx微升1號管	xx微摩爾/升
3	xx微升	xx微升2號管	xx微摩爾/升
4	xx微升	xx微升3號管	xx微摩爾/升
5	xx微升	0	0微摩爾/升

 

 

 

• 標準曲線測定

 

• 加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent C）到1.5毫升離心管
• 加入xx微升上述配制的YIJI標準液（Reagent E）
• 加入xx微升YIJI反應液（Reagent D）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進90℃干式恒溫儀孵育5分鐘，避免光照
• 放進冰槽里1分鐘
• 轉移到比色皿
• 即刻放進分光光度儀檢測（波長570nm）：獲得吸光讀數
• 重復實驗步驟1至8四次
• 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光讀數；橫座標（X軸）為標準氨基酸濃度（微摩爾/升）

 

• 樣品測定

 

• 加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent C）到1.5毫升離心管
• 加入500微升待測樣品
• 加入xx微升YIJI反應液（Reagent D）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進90℃干式恒溫儀孵育5分鐘，避免光照
• 放進冰槽里1分鐘
• 轉移到比色皿
• 即刻放進分光光度儀檢測（波長570nm）：獲得吸光讀數
• 根據標準曲線獲得樣品對應氨基酸濃度（微摩爾/升）

 

• 濃度計算

 

• 根據標準曲線獲得樣品對應氨基酸濃度（微摩爾/升）X稀釋倍數 =（微摩爾/升）

 

注意事項

 

• 本產品為25次操作，包括標準樣品
• 避免使用Tris 緩沖液、尿素等胺類物質處理樣品
• 操作時，須戴手套
• 系統操作時，標準樣品測定只需1次
• YIJI反應液（Reagent D）具有揮發性，嚴格密閉瓶蓋，避免光照
• 孵育時，避免光照 
• 本公司提供系列氨基酸檢測試劑產品 

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

使用承諾

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

訂購信息

單組分訂購信息

編號 名稱 規格

 

YJ19193.5 YIJI植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒       20次

YJ19193.5A YIJI清理液（Reagent A） 毫升

YJ19193.5B YIJI萃取液（Reagent B） 毫升

YJ19193.5C YIJI緩沖液（Reagent C） 毫升

YJ19193.5D YIJI反應液（Reagent D） 毫升

YJ19193.5E  YIJI標準液（Reagent E） 毫升

 

試劑盒訂購信息

 

產品編號	名稱	規格
YJ19074.1	細胞總氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19074.2	組織總氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19074.3	血液總氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19074.4	體液總氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19074.5	植物總氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19192.1	細胞總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19192.2	組織總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19192.3	血液總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19192.4	體液總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19192.5	植物總氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19193.1	細胞游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19193.2	組織游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19193.3	血液游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19193.4	體液游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19193.5	植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒	20次
YJ19194.1	細胞游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19194.2	組織游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19194.3	血液游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19194.4	體液游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次
YJ19194.5	植物游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒	20次