細胞TUNEL熒光測定試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

細胞TUNEL熒光測定試劑盒產品說明書

YIJI細胞TUNEL熒光測定試劑是一種旨在使用標準化的化學方法，包括固著、封阻、通透等完整步驟，從生長在載玻片上的新鮮培養細胞中探尋DNA斷點，即運用修飾過的核苷酸，在末端脫氧核糖核酸轉移酶（TdT）的幫助下，對DNA單鏈或雙鏈上斷點處的3’末端進行熒光素標記，原位探測和定量分析單細胞水平的DNA降解狀況的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。各種人體、動物、植物等培養細胞的DNA降解測定。廣泛用于細胞凋亡的研究。產品嚴格無菌，即到即用，反應敏感，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

細胞凋亡，或細胞程序性死亡，在諸如形態發育、免疫系統調節、以及腫瘤和神經退行性疾病等各種生物學過程中，起著實質性的作用。凋亡細胞具有形態、生化、和分子方面的顯著特征。其中內源性核酸酶的激活，將DNA鏈在核小體間連接區切成缺口，使核內DNA斷裂成小片斷。在組織細胞原位DNA切口處可被末端脫氧核糖核酸轉移酶（TdT）標記上生物素dUTP，即TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling），然后通過與熒光素綴合卵白素（FITC conjugated avidin）的反應，顯示綠色熒光（激發波長488nm，散發波長530nm）。

產品內容

YIJI清理液（Reagent A） 120毫升

YIJI固著液（Reagent B）   1毫升

YIJI封阻液（Reagent C） 500微升

YIJI通透液（Reagent D） 500微升

YIJI酶標液（Reagent E） 500微升

YIJI熒光液（Reagent F） 500微升

產品說明書   1份

保存方式

保存YIJI封阻液（Reagent C）、YIJI通透液（Reagent D）、YIJI酶標液（Reagent E）和YIJI熒光液（Reagent F）在－20℃冰箱里，嚴格避免反復凍融，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI熒光液（Reagent F），避免光照；有效保證6月

用戶自備

小型染色缸：用于載玻片的清洗操作

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

特別注意

• YIJI酶標液（Reagent E）不能在室溫下凍融，而必須在冰槽里凍融，凍融后即刻使用；嚴禁反復凍融；考慮分裝，以備下次使用
• YIJI熒光液（Reagent F）避免光照
• 每次移取試劑，須更換槍頭，以免污染母液，影響結果

實驗步驟

一、細胞預處理

• 準備好待測的生長在載玻片上的培養細胞
• 小心抽去細胞培養液
• 小心加上200微升YIJI清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿細胞樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上100微升YIJI固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI固著液（Reagent B）
• 室溫下，將載玻片置入50毫升YIJI清理液（Reagent A）中，孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上50微升YIJI封阻液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘
• 室溫下，將載玻片置入50毫升YIJI清理液（Reagent A）中，孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上50微升YIJI通透液（Reagent D），鋪滿整個樣品表面
• 置于冰槽里，孵育3分鐘
• 室溫下，將載玻片置入50毫升YIJI清理液（Reagent A）中，孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

二、斷點標記處理

• 小心加上50微升YIJI酶標液（Reagent E），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 在37℃濕潤的培養箱里，孵育1小時，保持濕潤，避免干燥
• 小心移去載玻片上的YIJI酶標液（Reagent E）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

三、樣本染色處理

• 小心加上50微升YIJI熒光液（Reagent F）在載玻片上，鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照
• 小心移去載玻片上的YIJI熒光液（Reagent F）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發波長488nm， 散發波長530nm）觀察：陽性細胞呈現綠色熒光

注意事項

• 本產品為10次操作
• 操作時，須戴手套
• YIJI封阻液（Reagent C）達到100％封閉效果，超過雙氧水封閉效果
• YIJI酶標液（Reagent E）嚴禁反復凍融
• YIJI清理液（Reagent A）50毫升置于小型染色缸里，可重復使用
• 所有操作在室溫下進行，除操作中規定之外
• 每次更換試劑溶液時，保持樣品表面基本晾干：可以使用餐巾綿紙吸干或槍頭抽掉
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察
• 本公司提供系列細胞凋亡試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定熒光清晰