超白金Tag DNA聚合酶產品說明書（中文版）

主要用途

超白金Tag DNA聚合酶是一種旨在方便、快速地進行各種復雜基因組模板，小片斷DNA，保真度要求高，擴增有難度的DNA擴增的重要反應分子。廣泛運用在DNA片段在5kb之內的PCR/RT-PCR/微衛星DNA擴增、DNA測序等技術操作。產物留有3′端A尾巴，可直接克隆。產品即到即用，無核酶污染，性能穩定，靈敏度、特異性、穩定性優勢明顯，擴增產量高。

技術背景

超白金Tag DNA聚合酶是一種熱穩定的由單條蛋白多肽組成（分子量約為94 kDa）的DNA聚合酶。通過將Thermus aquaticus DNA聚合酶的基因克隆，在大腸桿菌（E. coli）中表達后，分離純化而得到的。其具有5′－3′DNA聚合酶活性和5′－3′核酸外切酶活性，但無3′－5′核酸外切酶的活性。

超白金Tag DNA聚合酶的單位定義為在74℃條件下，30分鐘內能夠吸收10mM dNTPs，形成酸性不溶性物質所需的酶量作為一個活性單位。單位活性測試條件是：25mM TAPS（pH9.3），50mM KCl，2mM MgCl2，1 mM DTT，0.5mg/ml鮭魚精DNA，0.2mM dNTPs。

超白金Tag DNA聚合酶的儲存緩沖成分包括50％甘油，20mM Tris－HCl（pH8.0），0.1mM EDTA，1 mM DTT，穩定劑。

產品內容

超白金Tag DNA聚合酶（Reagent A）（5U/微升） 40微升

 10倍PCR完全緩沖液（Reagent B）    1毫升

 10倍PCR無鎂緩沖液（Reagent C）    1毫升

 25mM MgCl2（Reagent D）     500微升

 補充液（Reagent E）          1.5毫升

產品說明書          1份

保存方式

經常使用，保存在－20℃冰箱里；長期儲存，保存在－70℃冰箱里，避免反復凍融；有效保證6月

實驗提示

下列的反應體系為推薦使用，用戶可以按照自己的反應體系操作：

• 一次反應總量為50微升，依次加入下列建議使用的用量到0.5毫升PCR管里：

• 混勻，瞬時離心5秒
• 建議使用的PCR反應程序為：

• PCR產物置于－20℃保存，直到進行任何后續實驗
• 進行瓊脂糖凝膠電泳分析

注意事項

• 本產品為200酶單位總量
• 建議整個操作在4℃下進行
• 建議使用潔凈的PCR管和帶有濾芯的槍頭，以免污染
• 操作時，須戴手套
• 操作時，避免污染母液
• 根據用戶實際情況，調整各反應物成分的用量
• 本產品建議使用贈送的 10倍PCR完全緩沖液（Reagent B）和補充液（Reagent E）。該緩沖液經過精心研制、成功實驗證明的。用戶無需調整鎂離子濃度。其含有Ammonium Sulfate, Tris, Magnesium Chloride, Beta-Mercaptoethanol等
• 根據用戶PCR儀的性能，決定是否加入礦物油（Mineral Oil）
• 配制完成后，即刻進行擴增反應，以確保反應物的活性
• Tm=4（G+C）+2（A+T），用戶可以測試最佳Tm溫度。擴增片段3kb以上可以增加時間到2分鐘
• 對于基因組DNA的擴增，其循環延長時間為30秒至3分鐘，即小于500bp－30秒；小于2kb－1分鐘；大于2kb，每增加1kb，增加1分鐘
• 避免反復凍融
• 本產品同時分別提供 10倍PCR無鎂緩沖液（Reagent C），其中含有100mM Tris－HCl（pH  9.0）,500 mM KCl, 1%Triton X－100和 25mM MgCl2（Reagent D）溶液，便于用戶選擇。建議 25mM MgCl2（Reagent D）可以在50微升反應體系終加入3微升，其終濃度為1.5mM
• 本公司提供PCR一步法反應體系

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶污染
• 本產品經鑒定反應產量高