純化線粒體凍存液（生物能量保護）產品說明書（中文版）

主要用途

純化線粒體凍存液（生物能量保護）是一種旨在幫助冷凍環境下儲存各種分離的純化線粒體（人體和動物等），確保其膜完整性、維持新鮮狀態的超微結構和生物能量學功能的保護性介質。該溶液經過精心研制、成功實驗證明的。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，無病毒和支原體，維護線粒體活力高達95％以上。

技術背景

凍存保護（Cryopreservation）是長期儲藏和保存生物活體材料的基本手段。但是，在凍存過程中活體將受到物理或化學性傷害諸如冰結晶體的形成、滲透壓的變化以及化學物毒性等，尤其是致命性的活體內冰產生，所導致牽延和縮水等物理性損傷。作為凍存保護劑之一的二甲亞砜（dimethyl sulfoxide）被證實能夠阻止冰晶體的發生。在線粒體保存中，維護膜完整性、維持新鮮狀態下的超微結構和生物能量學功能達到90％以上，包括耗氧（oxygen consumption）、呼吸控制比（Respiratory Control Ratio；RCR）等。 

產品內容

凍存液（Reagent A）  50毫升

產品說明書           1份

保存方式

保存凍存液（Reagent A）在－20℃的冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于線粒體收集后離心

4℃微型臺式離心機：用于沉淀線粒體

2毫升凍存管：用于線粒體冷凍儲藏

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的凍存液（Reagent A）從－20℃的冰箱里取出，置于室溫下溶化。然后進行下列操作。

• 將分離純化的500微升線粒體懸液（50毫克/毫升）移入到1.5毫升離心管
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入500微升凍存液（Reagent A）
• 輕輕混勻顆粒群
• 每分鐘降溫1度
• 1小時后，放進－70℃的冰箱里保存
• 放進37℃恒溫水槽復蘇凍融（注意：避免過長；一旦融化，即刻終止孵育）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 進行后續操作

注意事項

• 本產品為50毫升規格
• 所有凍存操作和使用工具均須在嚴格無菌狀態下進行
• 操作時，避免污染母液
• 如果線粒體懸液容量低于100微升，可以直接加入凍存液（Reagent A）
• 凍存管線粒體凍存量可以達到每毫升50毫克
• 凍存和解凍的基本原則是冷凍速度緩慢（放進保溫箱里后，再放進－70℃冰箱里），解凍速度快速，這樣可以確保線粒體的質量
• 本公司提供系列細胞及其相關凍存產品
    

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無病毒和支原體污染
• 本產品經鑒定維護線粒體活力高達90％以上