（豬）體外卵母細胞成熟（in vitro maturation；IVM）培養生長因子（20倍）產品說明書（中文版）

主要用途

（豬）體外卵母細胞成熟（in vitro maturation；IVM）培養生長因子（20倍）是一種旨在幫助新鮮卵母細胞在體外環境下，獲得完全成熟的培養生長因子。其適合于家畜豬的卵母細胞的培養。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，無病毒和支原體，幫助卵母細胞完全成熟高達90％以上。

技術背景

體外生育技術（in vitro production；IVP）包括三大步驟：卵母細胞體外成熟（in vitro maturation）、體外受精（in vitro fertilization；IVF）和體外培養（in vitro culture；IVC）。運用體外系統產生胚胎，可以解決不育的問題。而動物胚胎的產生，可以提供胚胎干細胞、器官移植等。其中豬是許多生物醫學研究的重要模式動物。確保胚胎的發育和質量，卵母細胞的體外成熟是最基礎的步驟。發育能力的降低主要在于卵母細胞的不完全成熟和多精子穿透性（polyspermic penetration）過高。因此使用化學性精制培養液，可以避免使用成分不明確和不穩定的血清和卵泡液（follicle fluid；FF），同時在半胱氨酸（cysteine）和各種生長因子，例如人絨毛膜促性腺激素（hCG）和馬絨毛膜促性腺激素（eCG）等的幫助下，促進卵母細胞完全成熟，有利于后續精子穿透后精核（male pronucleus；MPN）的形成和胚胎發育。  

產品內容

生長液（Reagent A）   1毫升

產品說明書            1份

保存方式

保存在－20℃的冰箱里，有效保證6月

用戶自備

35mm細胞培養皿：用于樣品操作的容器

4℃微型臺式離心機：用于樣品操作

細胞培養箱：用于卵母細胞培養

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的生長液（Reagent A）從－20℃的冰箱里取出，置于冰槽里融化。然后進行下列操作。

• 準備好新鮮切除的動物卵巢組織
• 在4小時內，從3至6毫米大小的卵泡中吸出卵丘卵母細胞復合體（cumulus oocyte complexes；COC）
• 使用卵母細胞清理液清洗3次（注意：建議使用卵母細胞清理液－14009.3）
• 滴入100微升用戶自備的培養液到35mm細胞培養皿中預熱的礦物液（mineral oil）中（注意：建議使用體外卵母細胞成熟（in vitro maturation；IVM）培養液－14009.1）
• 轉移20個COC到培養皿中的培養液里
• 放進5％CO2細胞培養箱孵育22小時，溫度39℃，濕度飽和
• 移取COC，使用用戶自備的培養液清洗3次
• 再次滴入100微升用戶自備的培養液到35mm細胞培養皿中預熱的礦物液（mineral oil）中
• 轉移20個COC到培養皿中的培養液里
• 放進5％CO2細胞培養箱繼續孵育22小時，溫度39℃，濕度飽和
• （選擇步驟）評價卵丘擴展（cumulus expansion）和細胞成熟狀況（注意：建議使用卵母細胞核成熟苔紅素（orcein）熒光染色分析試劑盒－14025）
• （選擇步驟）移取COC，分離卵母細胞
• （選擇步驟）繼續后續體外受精
• 期待結果參考：

• 本產品經鑒定無病毒和支原體污染
• 本產品經鑒定促進卵母細胞成熟高達90％以上