核糖核酸酶抑制劑（RNasin）產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）是一種旨在快速有效和廣譜地抑制RNA酶活性的重要生物酶分子。廣泛運(yùn)用在cDNA合成、逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）、微型RNA（miRNA）擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄和翻譯、RNA測序的目標(biāo)mRNA保護(hù)，以及原位雜交、抗體制備、mRNA定位等技術(shù)操作。產(chǎn)品即到即用，無核酶污染，性能穩(wěn)定，抑制明顯。

技術(shù)背景

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）通過離子交換和親和層析技術(shù)從人胎盤中純化的分子量為50 kDa的天然蛋白質(zhì)，純度達(dá)90％以上。該抑制劑以1：1非共價(jià)結(jié)合的方式與RNA酶快速形成復(fù)合物，在廣譜pH范圍內(nèi)，非競爭性抑制RNA酶的活性，包括RNase A、B、C和人胎盤RNA酶，但不能抑制RNase T1、S1核酶、RNase H等。無核酸外切和內(nèi)切以及RAN酶活性。在溫度高于50℃、高濃度尿素、SDS和其它去垢劑存在的情況下，復(fù)合物變性，導(dǎo)致抑制作用失效。

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）的單位定義為抑制50％的總量5納克RNase A活性所需的抑制劑量作為一個(gè)活性單位。

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）的儲(chǔ)存緩沖成分包括20mM HEPES－KOH（pH 7.6），8 mM DTT，50mM KCl，50% Glycerol。

產(chǎn)品內(nèi)容

抑制劑（Reagent A）（40單位/微升）     62.5微升

產(chǎn)品說明書       1份

保存方式

經(jīng)常使用，保存在－20℃冰箱里；長期儲(chǔ)存，保存在－70℃冰箱里；避免反復(fù)凍融，有效保證6月

實(shí)驗(yàn)提示

下列的反應(yīng)體系為推薦使用，用戶可以按照自己的反應(yīng)體系操作：

• 一次反應(yīng)總量為20微升，其中分為兩步：

第一步：打開二級結(jié)構(gòu)

依次加入下列建議使用的用量到0.5毫升PCR管里：

• 混勻，瞬時(shí)離心5秒
• 放進(jìn)70℃干式恒溫儀，孵育3分鐘
• 即刻放進(jìn)冰槽里
• 第二步：進(jìn)行生成反應(yīng)

繼續(xù)依次加入下列建議使用的用量到上述PCR管里

• 混勻，瞬時(shí)離心5秒
• （使用Oligo（dT）18或特定引物）放進(jìn)42℃干式恒溫儀，孵育60分鐘

（使用Hexamer隨機(jī)引物）放進(jìn)37℃干式恒溫儀，孵育60分鐘

• 放進(jìn)70℃干式恒溫儀，孵育15分鐘
• 直接進(jìn)行后續(xù)第二鏈合成
• 或加入80微升DEPC 水，混勻
• 移取2微升進(jìn)行后續(xù)PCR擴(kuò)增

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為2500單位總量
• 避免反復(fù)凍融
• 使用前，混勻
• 建議使用量為每微升反應(yīng)液1單位
• 建議整個(gè)操作在4℃下進(jìn)行
• 建議使用潔凈的PCR管和帶有濾芯的槍頭，以免污染
• 根據(jù)用戶實(shí)際情況，調(diào)整用量
• 配制完成后，即刻進(jìn)行合成反應(yīng)，以確保反應(yīng)物的活性
• 避免樣品中含有高濃度的尿素或SDS
• 本公司提供系列RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無核酶污染
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定抑制作用強(qiáng)