總RNA樣品mRNA選擇純化試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

總RNA樣品mRNA選擇純化試劑是一種旨在針對(duì)富含RNA酶的組織或細(xì)胞樣品，采取分步實(shí)施，在先完成總RNA提取之后，進(jìn)一步通過親和樹脂特異結(jié)合的技術(shù)處理，以獲得高純度poly A＋ RNA的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種總RNA樣品（人體、動(dòng)物、植物等）的mRNA提取。產(chǎn)物可以直接用于Northern雜交、斑點(diǎn)雜交、體外翻譯、RNA分解酶的保護(hù)分析、RT-PCR、miRNA、構(gòu)建cDNA文庫、SAGE技術(shù)等各種后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，無核酶污染，操作簡(jiǎn)便，產(chǎn)物純度高，重復(fù)性好，堪稱國(guó)際上同類產(chǎn)品最佳。

技術(shù)背景

組織或細(xì)胞樣品中富含RNA酶，容易導(dǎo)致RNA的降解。為了避免直接純化mRNA時(shí)，RNA酶的污染和干擾，通過足量異硫氰酸胍（guanidine isothiocyanate）的作用，獲得總RNA。然后通過oligo dT樹脂的完全結(jié)合，有效達(dá)到純化mRNA的目的。

產(chǎn)品內(nèi)容

平衡液（Reagent A）   3毫升

親和液（Reagent B）      2.5毫升

高鹽液（Reagent C）       30毫升

低鹽液（Reagent D）       15毫升

洗脫液（Reagent E）        5毫升

濃縮液（Reagent F）      500微升

沉淀液（Reagent G）       10毫升

凈化液（Reagent H）       10毫升

保存液（Reagent I）  1.5毫升

離心柱   10套

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存親和液（Reagent B）和濃縮液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于核酸純化的容器

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于核酸沉淀

渦旋震蕩儀：用于混勻

平式搖蕩儀：用于混勻和孵育反應(yīng)物

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，從－20℃冰箱里取出親和液（Reagent B）置于冰槽里融化；然后搖勻親和液（Reagent B），移取250微升到新的1.5毫升離心管，放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心15秒，小心抽掉上清液，置入冰槽里備用。同時(shí)將洗脫液（Reagent E）放進(jìn)65℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作：

• 從－70℃冰箱里取出總RNA樣品，置于冰槽里融化
• 移取250微升（總量0.5至1毫克總RNA）到1.5毫升離心管
• 加入250微升平衡液（Reagent A）
• 渦旋震蕩5秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心15秒
• 移入含有親和液（Reagent B）的1.5毫升離心管
• 渦旋震蕩5秒
• 平放在平式搖蕩儀上室溫下孵育15分鐘，速度為100RPM
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心15秒
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升高鹽液（Reagent C），用手混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心15秒
• 小心抽去上清液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步11至13二次
• 加入1毫升低鹽液（Reagent D），用手混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心15秒
• 小心抽去上清液
• 加入500微升低鹽液（Reagent D），用手混勻
• 轉(zhuǎn)移到離心柱
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心15秒
• 更換1.5毫升收集管
• 加入200微升65℃預(yù)熱的洗脫液（Reagent E）到離心柱
• 室溫下靜置1分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心2分鐘，速度為16000g（13000RPM 例如eppendorf 5415）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟22至24一次
• 扔掉離心柱
• 加入50微升濃縮液（Reagent F）
• 加入1毫升沉淀液（Reagent G），用手上下傾倒混勻
• （選擇步驟）放進(jìn)－70℃冰箱里孵育10分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（13000RPM 例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent H）
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（13000RPM 例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入50微升保存液（Reagent I）
• 放進(jìn)－70℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆?/li>
• 或計(jì)算mRNA濃度：
  • 移取1微升mRNA樣品到1.5毫升離心管
  • 加入100微升保存液（Reagent I）,混勻
  • 即刻移入到100微升規(guī)格的石英比色杯
  • 放進(jìn)分光光度儀：波長(zhǎng)為260nm
  • 濃度為：微克/微升＝OD260 X 4

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 整個(gè)操作須戴手套，切莫觸碰操作液體
• 建議使用濾芯槍頭，并格外小心，防止降解RNA
• 建議所有的操作用品屬于RNA專用
• 總RNA提取后，清洗干凈，避免過度酸性
• 通常1毫克總RNA樣品可以提取10微克mRNA量
• 親和液（Reagent B）可以再生處理，重復(fù)使用；建議使用-mRNA純化樹脂再生試劑盒（20101）
• 本公司提供系列RNA產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無核酶成分
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化程度高