RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

 RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）試劑是一種旨在用于配制各種濃度，包括變性或非變性的聚丙烯凝膠，進行常規低分子RNA 電泳的基本技術方法。產品即到即用，無菌過濾，無核酶污染，性能穩定，高純均一，重復性好，簡化操作，建立標準化體系。

技術背景

瓊脂糖（agarose）或聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis；PAGE）是分離、識別和純化RNA分子的標準方法。聚丙烯酰胺凝膠電泳具有分辨力強，甚至可達1堿基差異；上樣量大（可達10毫克），不影響其分辨力；RNA回收純度極高。聚丙烯酰胺凝膠電泳通常分為非變性凝膠電泳（non-denaturing）和變性（denaturing）凝膠電泳。前者用于觀察RNA分子的構象與遷移相關性或純化天然（native）分子；后者用于RNA序列分析、RNA酶保護檢測以及RNA標記探針（包括同位素標記）的純化。

產品內容

基礎液（Reagent A）       50毫升

緩沖液（Reagent B）       20毫升

變性液（Reagent C）    100毫升

凝結液（Reagent D）      4毫升

穩定液（Reagent E）    400微升

產品說明書                          1份

保存方式

保存凝結液（Reagent D）在-20℃冰箱里，變性液（Reagent C）保存在室溫下；其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月

用戶自備

無離子水：用于稀釋緩沖體系

TBE緩沖液（12021）：用于電泳工作

直立電泳儀：用于電泳運行

50毫升錐形離心管：用于配制膠體液的容器

實驗操作

實驗開始前，將冰箱里的試劑置于室溫下融化。然后進行下列操作。

• 準備好1個50毫升錐形離心管和清洗干凈的電泳槽玻璃板（注意：使用5％氯化鉀在甲醇溶液里清洗）
• 根據用戶的具體要求：分離RNA分子范圍，依次如下表所示加入試劑到50毫升錐形離心管里

• （選擇步驟）如果為變性電泳，加入10毫升變性液（Reagent C）
• 加入適量的用戶自備的無離子水至終容量為20毫升，混勻
• 加入400微升凝結液（Reagent D）
• 加入40微升穩定液（Reagent E）
• 混勻后，即刻移入玻璃槽，避免氣泡
• 插入0.75毫米厚的10孔梳
• 在室溫下孵育45分鐘，或直至膠體凝結
• 將玻璃槽移入到電泳槽里
• 加入用戶自備的1倍TBE緩沖液
• 小心拔去10孔梳
• 用吸管或1毫升槍頭沖洗樣品孔備用
• 接上電源
• 電泳預運行15分鐘，電壓為250伏
• 拔掉電源
• 再次用吸管或1毫升槍頭沖洗樣品孔
• 樣品準備
• 上樣后繼續電泳運行1小時，或直至溴酚藍（Bromophenol Blue）染料前沿到達膠底前1厘米處
• 進行后續操作

注意事項

• 本產品為10次（10％PAGE）操作
• 操作時，須戴手套
• 基礎液（Reagent A）具有毒性，注意操作安全
• 使用時，避免對母液的污染
• 變性液（Reagent C）如有沉淀，可以加熱混勻后使用
• 建議將電泳玻璃板用乙醇、甲醇以及硅化液處理
• 本公司提供系列RNA電泳分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶和蛋白酶污染