細胞衰老特異性晚期脂褐素高碘酸希爾法品紅亞硫酸鹽原位染色試劑盒

產品說明書（中文版）

 

主要用途

細胞衰老特異性晚期脂褐素高碘酸希爾（PAS）法品紅亞硫酸鹽（FUCHSIN SULFITE）原位染色試劑是一種旨在通過高碘酸希爾染料與細胞內晚期狀態自發氧化后的蛋白和脂質發生反應， 產生品紅色或紫紅色，來分析細胞樣本中晚期脂褐素成分，作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細胞的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于動物細胞的脂褐素檢測。廣泛應用于細胞生物學研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

 

技術背景

 

細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學標記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細胞內與年齡相關的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發性溶酶體內。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟、神經和腎上腺皮質的網狀帶等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質，是細胞中的自噬溶酶體酶未能將這些細胞碎片消化掉，進而發生某些化學物理變化而形成了一種不溶性小體沉淀而成，成為細胞衰老中后期的獨立指征。脂褐素分為早期和晚期，晚期的脂褐素氧化后產生的乙醛基團，與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發生反應，呈現品紅色（magenda）或紫紅色，表明脂褐素陽性。

 

產品內容

 

清理液（Reagent A）  250毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

氧化液（Reagent C）   10毫升

染色液（Reagent D）   10毫升

平衡液（Reagent E）   30毫升

產品說明書

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D），嚴格密封瓶口，避免光照；氧化液（Reagent C）和染色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

 

用戶自備

 

蘇木素復染試劑盒（80050）：用于常規染色后復染

小型染色缸：用于細胞染色操作

光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

 

實驗步驟

 

操作一：細胞載玻片染色

 

• 樣本氧化處理

 

• 取出待測的細胞載玻片或細胞涂片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 在室溫下孵育15分鐘
• 小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升氧化液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的氧化液（Reagent C）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟13至14一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色液（Reagent D），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見深紅色
• 小心移去載玻片上的染色液（Reagent D）
• 小心加上200微升平衡液（Reagent E），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下孵育30秒
• 小心移去載玻片上的平衡液（Reagent E）
• 重復實驗步驟4至6二次
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

 

三、 （選擇步驟）樣本復染處理

 

• 樣本復染處理（建議使用蘇木素復染試劑盒－80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：呈現大小不一的紫紅色或粉紅色顆粒為脂褐素陽性細胞，細胞核呈現藍色（復染）

 

 

 

操作二：24孔細胞培養板染色

 

一、樣本氧化處理

 

• 小心抽去24孔細胞培養板里的培養液
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面
• 小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）
• 每孔加入400微升固著液（Reagent B），覆蓋整個生長表面
• 在室溫下孵育15分鐘
• 小心抽去每孔里的固著液（Reagent B）
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 每孔加入400微升氧化液（Reagent C），覆蓋整個生長表面
• 在室溫下孵育10分鐘
• 小心抽去氧化液（Reagent C）
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟13和14一次

二、樣本染色處理

• 小心加上400微升染色液（Reagent D），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見深紅色
• 小心抽去染色液（Reagent D）
• 小心加上400微升平衡液（Reagent E），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育30秒
• 小心抽去平衡液（Reagent E）
• 重復實驗步驟4至6二次
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復實驗步8和10三次

 

三、 （選擇步驟）樣本復染處理

 

• 樣本復染處理（建議使用蘇木素復染試劑盒－80050）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：呈現大小不一的紫紅色或粉紅色顆粒為脂褐素陽性細胞，細胞核呈現藍色（復染）

 

注意事項

 

• 本產品為50次（細胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作
• 本產品不適合于含有紅細胞的樣本
• 操作時，須帶手套
• 所有操作在室溫下進行
• 氧化液（Reagent C）和染色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全
• 染色液（Reagent D）出現沉淀，可以溫熱、攪拌或過濾后使用
• 染色液（Reagent D）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見深紅色即可終止染色
• 建議使用蘇木素復染試劑盒（40011），增強染色對比度
• 細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
• 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

 

質量標準

 

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定著色清晰