冰凍切片組織酸性磷酸酶（ACP）活性染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

冰凍切片組織酸性磷酸酶（ACP）活性染色試劑是一種旨在使用偶聯偶氮技術，在酸性環境下， 呈現出紫紅色沉淀現象，來分析組織樣本中酸性磷酸酶表達的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于動物組織冰凍切片，同時也適合原生代或培養細胞的酶活性檢測�？捎糜诠琴|細胞病理生理的研究的鑒定。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，靈敏牢固，顯色清晰。

技術背景

酸性磷酸酶（acid phosphatase；ACP；EC 3.1.3.2），是一種酸性水解酶（acid hydrolase）和去磷酸化酶，即磷酸單酯酶（phosphomonoesterase），在酸性環境下，水解磷酸單酯化合物而釋放出無機磷。正常情況下，位于溶酶體內，作為溶酶體的分子標記。在動物體內和植物中普遍存在。酸性磷酸酶按照組織分布、染色體定位、分子量、氨基酸序列、抗性特點等，分成不同的同工酶，其中包括酒石酸（tartrate）敏感/氟化物抗性的溶酶體型（lysosomal；100KD）、前列腺型（prostatic；100KD）和睪丸型（testicular），酒石酸抗性/氟化物敏感的紅細胞型（erythrocytic；18KD）、破骨細胞型（osteoclastic；37KD）和組織巨噬細胞型（macrophagic；37KD）。酸性磷酸酶異常與肝病、骨病、何杰金氏�。℉odgkin's disease）等有關。基于底物萘酚AS-MX磷酸鹽（naphthol AS-MX phosphate），在酸性環境下，酸性磷酸酶催化其水解，釋放出萘酚（naphthol-AS），進而與重氮鹽耐曬紅紫（Fast red violet）偶聯，于是在酶的活動處形成不溶性紫紅色沉淀的偶氮染料，由此證明酸性磷酸酶活性。其反應體系為：

 ACP

naphthol AS-MX phosphate  ＋  H2O  →  naphthol AS  ＋  phosphate

naphthol AS  ＋  Fast red violet  →  azo dye

產品內容

清理液（Reagent A）   40毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

反應液（Reagent C）  200微升

染色液（Reagent D）   20毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存反應液（Reagent C）和染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免反復凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

甲基綠復染試劑盒（40010）：用于常規染色后復染

1.5毫升離心管：用于配制染色工作液的容器

恒溫培養箱：用于反應孵育

光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的反應液（Reagent C）和染色液（Reagent D）從－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化，并避光。然后移取1毫升染色液（Reagent D）到1.5毫升離心管，加入10微升反應液（Reagent C），充分混勻后，標記為染色工作液，室溫下，置入暗室。然后進行下列操作：

• 樣本固著處理

• 取出待測的5至10微米厚的冰凍組織切片或細胞載玻片
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片或載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育2分鐘
• 小心移去切片或載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色工作液，鋪滿整個切片或載玻片樣品表面
• 在37℃恒溫培養箱孵育15分鐘；或直至可見黃色（注意：避免光照）
• 小心移去切片或載玻片上的染色工作液
• 室溫下，加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的清理液（Reagent A）

• 樣本復染處理（選擇步驟）

• 樣本復染處理（甲基綠）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性細胞呈現紫紅色，背景黃色，核為綠色

注意事項

• 本產品為50次操作 
• 操作時，須帶手套
• 染色工作液配制后，即刻使用，不得超過1小時
• 染色工作液根據需要配制，每毫升，可以染色5個樣本
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 細胞固定建議不要超過2分鐘，以免酶活性降低
• 如果樣品中酶活性較低，細胞染色可以延長至45分鐘
• 細胞染色注意不要過度
• 直接封片處理，不要使用有機溶劑（乙醇、二甲苯等），否則會使染色褪色
• 細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰