通用包涵體蛋白溶解試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

通用包涵體蛋白溶解試劑是一種旨在使用化學(xué)方法快速充分裂解細菌細胞，萃取包涵體，通過常用陰離子去垢劑N-十二烷基肌氨酸鈉（Syrkosyl），使不溶性蛋白聚集體溶化復(fù)原成可溶性蛋白質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細菌內(nèi)重組蛋白（融合蛋白）、尤其是不溶性蛋白的可溶性復(fù)原處理�？珊罄m(xù)用于特定蛋白純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質(zhì)譜分析等等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，操作便捷，溶化效果理想。

技術(shù)背景

細菌作為宿主細胞廣泛用于重組蛋白的表達。在高度表達蛋白的純化過程中，80％的重組蛋白形成聚集體，而不可溶，變成包涵體（inclusion body）。包涵體內(nèi)的蛋白折疊異常，但是表達蛋白豐富，容易分離純化，不易被內(nèi)源性蛋白酶水解。通過特殊化學(xué)處理，包括變性劑、還原劑、鰲和劑等，能使不溶性狀態(tài)恢復(fù)為可溶性狀態(tài)，便于后續(xù)的各種生物學(xué)分析。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A） 50毫升

裂解液（Reagent B）     250微升

溶解液（Reagent C）       1毫升

強化液（Reagent D）       4毫升

保存液（Reagent E）  5毫升

產(chǎn)品說明書  1份

保存方式

保存裂解液（Reagent B）和溶解液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

50毫升錐形離心管：用于細菌收集的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

2.2毫升離心管：用于樣品操作的容器

臺式離心機：用于細菌沉淀收集

4℃微型臺式離心機：用于細菌清洗沉淀和收集蛋白

200瓦超聲儀：用于細菌細胞裂解

恒溫水�。河糜诜磻�(yīng)孵育

平式搖蕩儀：用于反應(yīng)孵育

實驗步驟

• 準(zhǔn)備50毫升過夜培養(yǎng)的菌液（或OD600＝1.0）
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 轉(zhuǎn)移到2.2毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群 
• 加入25微升裂解液（Reagent B），混勻
• 置于冰槽里孵育15分鐘
• 加入100微升溶解液（Reagent C），混勻
• （選擇步驟）置于200瓦超聲儀下，50％功率，猝擊2次，10秒1次，間隙30秒（注意：樣品管置于冰槽里）
• 放進37℃恒溫水浴孵育2分鐘
• 室溫下，平放在平式搖蕩儀上孵育25分鐘，速度為50RPM
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）移取20微升進行蛋白定量（建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）
• （選擇步驟）移取40微升進行SDS－PAGE電泳 
• 加入2毫升清理液（Reagent A）
• 加入330微升強化液（Reagent D）
• 加入400微升保存液（Reagent E），混勻
• 分裝到1.5毫升離心管，即刻放進－70℃冰箱保存

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 本產(chǎn)品用于一般包涵體的溶解處理
• 操作時須戴手套
• 操作時，注意溫度要求
• 本產(chǎn)品處理后，50毫升菌液通�？梢垣@得20至90％（平均50％）可溶性蛋白或1至5毫克重組蛋白，但是不同菌種的蛋白可溶性程度和產(chǎn)量會有差異
• 如果放在－70℃冰箱里儲存?zhèn)溆茫�避免反�?fù)凍融
• 如果復(fù)性效果欠佳，建議進一步使用可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋）試劑盒－30044.4或包涵體蛋白復(fù)性（物理透析）試劑盒－30044.5
• 本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無蛋白酶污染