免疫組化超敏型辣根過氧化酶/四甲基聯(lián)苯胺顯色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

免疫組化超敏型辣根過氧化酶/四甲基聯(lián)苯胺（HRP－TMB）顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化，輔以增效穩(wěn)定劑的參與，使底物四甲基聯(lián)苯胺氧化形成藍(lán)黑色沉淀產(chǎn)物，以此鑒定過氧化物酶活性，進(jìn)而確定目標(biāo)分子表達(dá)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于辣根過氧化酶標(biāo)記的免疫組織化學(xué)檢測和原位雜交等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復(fù)性好。

技術(shù)背景

四甲基聯(lián)苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）是過氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在過氧化物酶的催化下，電子供體TMB底物在過氧化氫氧化下失去電子，產(chǎn)生游離自由陽離子單電子氧化產(chǎn)物，輔以增效穩(wěn)定劑，在pH3.3條件下，呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成藍(lán)黑色沉淀產(chǎn)物，且不受乙醇影響。被用于檢測過氧化物酶的活性，靈敏度特高，特異性好。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A） 20毫升

染色液（Reagent B）  5毫升

終止液（Reagent C）     5毫升

產(chǎn)品說明書      1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent B），避免光照；終止液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

無離子水：用于清洗染色后的樣品

中性紅復(fù)染試劑盒（80068）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

光學(xué)顯微鏡：用于組化染色后觀察分析

酶標(biāo)儀：用于比色定量檢測

實(shí)驗(yàn)步驟

• 免疫組化染色

• 準(zhǔn)備好含有待測蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理等步驟
• 加上100微升清理液（Reagent A），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2至3三次
• 小心加上100微升染色液（Reagent B），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5至15分鐘，或直至樣本出現(xiàn)藍(lán)色，避免光照
• 小心移去切片上的染色液（Reagent B）
• 加上200微升用戶自備的無離子水，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去切片上的無離子水
• （選擇步驟）進(jìn)行中性紅復(fù)染（注意：建議使用中性紅復(fù)染試劑盒－80068）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽性呈現(xiàn)亮藍(lán)色

• ELISA染色

• 準(zhǔn)備好待測的ELISA酶標(biāo)板：包括樣品結(jié)合、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理等步驟
• 加入100微升清理液（Reagent A）
• 小心移去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2至3三次
• 小心加入100微升的染色液（Reagent B） 
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照（注意：可見藍(lán)色沉淀）
• 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測讀：波長650nm
• 加入100微升終止液（Reagent C） 
• 輕輕搖勻酶標(biāo)板（注意：陽性樣品呈現(xiàn)黃色）
• 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測讀：波長450nm

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 本產(chǎn)品較之二氨基聯(lián)苯胺（DAB）等染色，敏感10至20倍
• 操作時(shí)，須戴手套
• 終止液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
• 染色時(shí)間可以根據(jù)情況調(diào)整，以免造成過度染色或背景過深
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• 本產(chǎn)品只能用于辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的組織化學(xué)沉淀反應(yīng)和原位雜交，不適合于免疫印跡染色
• 染色后可用中性紅復(fù)染，增強(qiáng)對照；建議使用中性紅復(fù)染試劑盒－80068
• 如果染色過快或過深，建議稀釋一抗和二抗?jié)舛?/li>
• 如果用戶沒有650nm的濾波器，可以使用630至650之間的任一波長
• 使用終止液（Reagent C）后，其敏感度（即吸光讀數(shù)）將會(huì)增加2至3倍
• 使用終止液（Reagent C）后1小時(shí)內(nèi)，須完成測讀，否則其吸光讀數(shù)將降低10％
• 本公司提供系列免疫組化染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰