植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑是一種旨在通過特殊離液劑，增強融化效力，快速充分裂解植物組織，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，通過超速離心，分離和收集所有可溶性植物組織細胞膜蛋白質（完整蛋白和跨膜蛋白以及膜相關蛋白等）的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種新鮮或凍存植物組織，包括葉片（leaf）、谷粒（grain）、種子（seed）等樣品膜蛋白的制備。可直接用于后續蛋白電泳（SDS-PAGE）、西方雜交（Western blotting）、親和層析純化（affinity chromotagraphy）、免疫沉淀（immunoprecipitation）、蛋白質相互作用分析（protein-protein interaction）、特異性表達識別（specific expression identification）和質譜分析等。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，收集效果好。

技術背景

通過特殊的離液劑（chaotropic reagent）和非離子性去垢劑，例如硫脲（thiourea）和Brij 58等，以及蛋白酶抑制混合劑的共同作用，既防止裂解后植物組織內各種活性蛋白成分遭到活化的內源性蛋白酶的破壞，充分保留組織細胞膜蛋白的免疫和生物學活性，又確保膜蛋白（完整蛋白integral protein和跨膜蛋白transmembrane protein）的高產萃取，并更大程度地可溶性，便于后續電泳和質譜分析。 

產品內容

清理液（Reagent A）      60毫升

裂解液（Reagent B） 60毫升

活性液（Reagent C）     300微升

溶解液（Reagent D）      20毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

液氮管：用于組織凍存處理

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的試劑從－20℃的冰箱里取出，室溫下凍融。然后進行下列操作。

• 準備好植物組織，例如葉片、種子等，并秤重200毫克 
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入3毫升清理液（Reagent A）清洗
• （選擇步驟）抽去清理液
• 移入到一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個新的預冷的2毫升離心管
• 加入1毫升裂解液（Reagent B）（注意：如果裂解液（Reagent B）出現結晶析出，可以溫育后使用） 
• 加入5微升活性液（Reagent C）
• 強力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
• 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）
• 將所有組織勻漿物移入2毫升離心管
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的2毫升離心管
• 即刻放進4℃微型臺式離心機離心30分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升裂解液（Reagent B）（注意：如果裂解液（Reagent B）出現結晶析出，可以溫育后使用） 
• 加入5微升活性液（Reagent C）
• 強力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 室溫下孵育5分鐘
• 即刻放進4℃微型臺式離心機離心30分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 重復實驗步驟19至24一次
• 加入1毫升溶解液（Reagent D）（注意：如果溶解液（Reagent D）出現結晶析出，可以溫育后使用）
• 強力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 室溫下孵育15分鐘，期間每隔5分鐘渦旋震蕩5秒
• 即刻放進4℃微型臺式離心機離心30分鐘，速度為16000g
• 小心移取上清液到新的2毫升離心管
• 放進－70℃的冰箱里備用
• 或放進冰槽里，繼續后續操作

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時須戴手套
• 建議一次操作的組織重量在10至250毫克
• 建議使用新鮮或冰凍保護良好的植物組織
• 如果組織含有高濃度的多糖和多酚，建議使用多糖/多酚植物組織蛋白制備預處理試劑盒－30089
• 碾碎組織步驟：可以將液氮處理的組織放進研缽研磨成粉
• 如果放在－70℃冰箱里儲存備用，避免反復凍融
• 本公司提供系列植物組織蛋白制備試劑產品
    

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無蛋白酶污染