植物總糖蛋白樹脂法純化試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

植物總糖蛋白樹脂法純化試劑是一種旨在通過(guò)麥胚凝集素親和樹脂的高度選擇性結(jié)合，進(jìn)一步競(jìng)爭(zhēng)性溫和洗脫，獲得純化總糖蛋白的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于植物細(xì)胞或組織裂解懸液等復(fù)雜性蛋白體系中的糖蛋白的分離純化等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，純化結(jié)合能力強(qiáng)（100微克/次），回收純度和效率可達(dá)95％。

技術(shù)背景

蛋白質(zhì)糖基化（protein glycosylation）是常見的轉(zhuǎn)譯后修飾。在真核和原核生物中，通過(guò)天門冬酰胺（asparagine），即N-糖基；或絲氨酸/蘇氨酸（serine/threonine）部位，即O-糖基的寡聚糖（oligopolisaccharide）進(jìn)行糖基化。其作用于免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞黏附和接觸性抑制、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、防止蛋白降解、炎癥反應(yīng)和其它生物過(guò)程。使用親和層析技術(shù)，捕獲目標(biāo)蛋白中的多糖（glycan）成分，其中麥胚凝集素（wheat germ agglutinin；WGA）樹脂能夠優(yōu)先結(jié)合N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetylglucosamine；GlcNAc）和終端N-乙酰氨基葡萄糖，以及唾液酸（sialic acid）。N-乙酰氨基葡萄糖是N-糖基和O-糖基糖蛋白的基本結(jié)構(gòu)分子，由此獲得純化的糖蛋白。 

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）  10毫升

親和液（Reagent B）      500微升

洗脫液（Reagent C）       5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書       1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

平式搖蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

實(shí)驗(yàn)步驟

• 準(zhǔn)備好用戶自備的蛋白樣品
• 移取5毫克（100微升）樣品到2毫升離心管
• 加入800微升緩沖液（Reagent A），用手傾倒混勻
• 用手搖勻親和液（Reagent B）
• 迅速移取100微升親和液（Reagent B）到上述樣品管里，用手混勻
• 平放在平式搖蕩儀上，在4℃溫度下孵育4小時(shí)，速度為50RPM（注意：確保管內(nèi)液體流動(dòng)）
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升緩沖液（Reagent A），用手混勻
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至11二次
• 加入250微升洗脫液（Reagent C），用手混勻
• 平放在平式搖蕩儀上，在4℃溫度下孵育30分鐘，速度為50RPM（注意：確保管內(nèi)液體流動(dòng)）
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心移取上清液到預(yù)冷的新的1.5毫升離心管，置于冰槽里
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至16一次
• 保存純化的蛋白在－70℃冰箱里
• 或移取10至20微升進(jìn)行SDS-PAGE電泳鑒定以及BRADFORD蛋白定量 

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為5次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 整個(gè)操作在4℃溫度下進(jìn)行
• 親和液（Reagent B）建議保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，建議分裝；如果保存在4℃溫度下，維持2月性能穩(wěn)定
• 親和液（Reagent B）每次使用100微升，每100微升可結(jié)合100微克純化卵類粘蛋白（ovomucoid），純度和回收率可高達(dá)95％
• 親和液（Reagent B）結(jié)合能力取決于蛋白性質(zhì)、蛋白分子量大小、蛋白可溶性程度、樣品環(huán)境等各種因素
• 通常洗脫次數(shù)為2次，每次200至300微升；增加洗脫次數(shù)和容量提高產(chǎn)量非常有限
• 建議使用BRADFORD定量方法進(jìn)行蛋白定量（－Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030），避免使用280nm檢測(cè)
• SDS-PAGE是檢測(cè)糖蛋白純度的最佳方法
• 本公司提供系列糖蛋白處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化效果滿意