細(xì)胞樣品細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

細(xì)胞樣品細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑是一種旨在使用抗細(xì)胞色素C單克隆抗體以及熒光染料綴合物二抗，通過雙重參數(shù)細(xì)胞流式儀定量檢測樣品中細(xì)胞色素C表達(dá)水平的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種活體細(xì)胞（動物、人體、植物等）的細(xì)胞色素C表達(dá)水平的測定。廣泛用于細(xì)胞凋亡的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，反應(yīng)敏感，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

細(xì)胞色素C（CYTOCHROME C）在細(xì)胞凋亡中扮演著重要作用。細(xì)胞色素C位于線粒體內(nèi)外膜之間。當(dāng)細(xì)胞凋亡時，它從線粒體內(nèi)釋放到細(xì)胞漿里，引起一系列的信號通道的下游反應(yīng)。通常使用免疫組化方法定量或定性檢測細(xì)胞色素C的蛋白表達(dá)水平標(biāo)記。流式細(xì)胞術(shù)（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發(fā)展起來的集計算機(jī)、激光、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)為一體的高科學(xué)技術(shù)。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）    100毫升

固著液（Reagent B）     50毫升

封阻液（Reagent C）     60毫升

抗體液（Reagent D）    700微升

染色液（Reagent E）    600微升

復(fù)染液（Reagent F） 5毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存固著液（Reagent B）、封阻液（Reagent C）、抗體液（Reagent D）、染色液（Reagent E）和復(fù)染液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗體液（Reagent D）和染色液（Reagent E）嚴(yán)禁反復(fù)凍融；染色液（Reagent E）和復(fù)染液（Reagent F），避免光照；有效保證6月

用戶自備

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細(xì)胞脫離

完全細(xì)胞培養(yǎng)液（12052）：用于中和胰蛋白酶的處理

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于細(xì)胞染色的容器

（微型）臺式離心機(jī)：用于樣品操作

細(xì)胞流式儀：用于細(xì)胞熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里試劑盒中的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：

• 準(zhǔn)備1個6孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞（1 X 10⁶細(xì)胞/孔）
• 小心抽去培養(yǎng)液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），鋪滿培養(yǎng)孔表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 加入1毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育1分鐘
• 加入3毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液
• 移取細(xì)胞混勻液到15毫升錐形離心管
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
• 小心抽去上清液
• 加入3毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• （選擇步驟）細(xì)胞計數(shù)
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
• 小心抽去上清液
• 加入3毫升－20℃預(yù)冷的固著液（Reagent B），混勻細(xì)胞顆粒群
• 置于冰槽里孵育15分鐘或過夜
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
• 小心抽去上清液
• 加入3毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升封阻液（Reagent C），上下抽吸混勻
• 轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管
• 室溫下孵育30分鐘
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 用手指輕彈管底，使細(xì)胞顆粒松動
• 加入70微升抗體液（Reagent D），充分混勻
• 室溫下孵育45分鐘
• 加入1毫升封阻液（Reagent C），混勻
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 重復(fù)實驗步驟30至32一次
• 用手指輕彈管底，使細(xì)胞顆粒松動
• 加入60微升染色液（Reagent E），充分混勻
• 室溫下孵育45分鐘，避免光照
• 加入1毫升封阻液（Reagent C），混勻
• 渦旋震蕩3秒
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 重復(fù)實驗步驟37至40二次
•  加入500微升復(fù)染液（Reagent F），用槍頭充分混勻
• 移入到細(xì)胞流式儀專用測試管（可放進(jìn)4℃冰箱里待測），避免光照
• 即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光器，觀察50000個細(xì)胞以上
• 建立地形圖或散點圖以及直方圖分析

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次操作量
• 操作時，須戴手套，以防污染
• 孵育時，避免光照
• 建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析。如果放進(jìn)4℃冰箱里待測，不要超過3天
• 細(xì)胞流式儀分析前，須混勻內(nèi)容物
• 細(xì)胞檢測量不得少于10000個
• 建議測試陽性或陰性對照組
• 檢測時，須彌補(bǔ)電子補(bǔ)償，以去除雙重參數(shù)的光譜重疊
• 告知流式儀技術(shù)員有關(guān)細(xì)胞類型
• 本公司提供系列蛋白表達(dá)分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰