赫特（HIRT）法病毒DNA純化試劑盒產品說明書

主要用途

赫特（HIRT）法病毒DNA純化試劑是一種旨在從感染細胞中的赫特上清液里，提取病毒或動物細胞非核內DNA的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物、人體細胞和組織樣品中病毒DNA的萃取。產品即到即用，性能穩定，操作方便，去蛋白程度和DNA分離產量高。

技術背景

病毒感染宿主細胞后細胞核內常常存在一些非整合的線形或環狀雙鏈DNA分子，通常稱為赫特（Hirt）DNA。赫特DNA存在于細胞上清液中，與病毒顆粒或病毒粒子（virions）攜帶的特征性病毒DNA一樣。于是感染細胞的上清液又稱為赫特上清液。同樣，動物細胞或組織細胞中游離于細胞核外的小分子量的DNA也可以采取赫特技術分離。

產品內容

清理液（Reagent A）      50毫升

赫特液（Reagent B）      40毫升

酶解液（Reagent C）  1毫升

鹽析液（Reagent D）  5毫升

去干擾液（Reagent E）     200微升

萃取液（Reagent F）      20毫升

濃縮液（Reagent G）  5毫升

沉淀液（Reagent H） 50毫升

凈化液（Reagent I） 50毫升

溶解液（Reagent J）  5毫升

產品說明書     1份

保存方式

保存酶解液（Reagent C）、去干擾液（Reagent E）和萃取液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里

用戶自備

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細胞脫離

完全細胞培養基（12052）：用于中和胰蛋白酶脫離

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

微型臺式離心機：用于沉淀

渦旋震蕩儀：用于混勻樣品反應物

實驗步驟

• 細胞樣品

• 準備1個6孔細胞培養板的細胞
• 抽掉6孔細胞培養板里的1孔培養液
• 輕輕沿壁加入2毫升清理液（Reagent A），清洗生長的細胞表面
• 小心抽掉清理液
• 加入500微升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養平面
• 放進37℃培養箱孵育1分種
• 手擊振動培養瓶，使細胞脫落，然后加入1毫升用戶自備的完全細胞培養液
• 移入1.5毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心15秒，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入800微升赫特液（Reagent B），混勻
• 加入40微升酶解液（Reagent C），輕輕混勻
• 放進37℃恒溫水槽孵育2小時
• 加入200微升鹽析液（Reagent D）
• 放進4℃冰箱里孵育2小時或過夜
• 放進4℃微型臺式離心機離心30分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出900微升上清液到新的1.5毫升離心管
• 加入10微升去干擾液（Reagent E）
• 放進37℃恒溫水槽孵育20分鐘
• 移出450微升（二分之一內容物）到另一個新的1.5毫升離心管
• 分別加入450微升萃取液（Reagent F）
• 渦旋震蕩儀上強烈震蕩30秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 分別移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位交界面的溶液
• 分別加入100微升濃縮液（Reagent G）
• 分別加入1毫升沉淀液（Reagent H）
• 渦旋震蕩儀上強烈震蕩30秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 分別加入1毫升凈化液（Reagent I）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 分別加入25微升溶解液（Reagent J）
• 合并2管為1管離心管

二、 組織樣品

• 手術取出動物組織，并秤重以確定100毫組織重量  
• （選擇步驟）放進預冷的1.5毫升離心管
• （選擇步驟）加入1毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個1.5毫升離心管
• 加入800微升赫特液（Reagent B），混勻
• 加入40微升酶解液（Reagent C），輕輕混勻
• 放進37℃恒溫水槽孵育2小時
• 加入200微升鹽析液（Reagent D）
• 放進4℃冰箱里孵育2小時或過夜
• 放進4℃微型臺式離心機離心30分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出900微升上清液到新的1.5毫升離心管
• 加入10微升去干擾液（Reagent E）
• 放進37℃恒溫水槽孵育20分鐘
• 移出450微升（二分之一內容物）到另一個新的1.5毫升離心管
• 分別加入450微升萃取液（Reagent F）
• 渦旋震蕩儀上強烈震蕩30秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 分別移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位交界面的溶液
• 分別加入100微升濃縮液（Reagent G）
• 分別加入1毫升沉淀液（Reagent H）
• 渦旋震蕩儀上強烈震蕩30秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 分別加入1毫升凈化液（Reagent I）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 分別加入25微升溶解液（Reagent J）

合并2管為1管離心管

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時須戴手套
• 整個操作須嚴格注意生物安全
• 可以在35mm細胞培養皿、25cm²細胞培養瓶和其它培養板進行操作，用量需適當調整
• 赫特液（Reagent B）和酶解液（Reagent C），使用前，須溫育至試劑澄清或溶解即可
• 本公司提供系列DNA萃取試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定去蛋白程度和分離產量高