革蘭氏陽性細菌基因組DNA純化試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

革蘭氏陽性細菌基因組DNA純化試劑是一種旨在通過化學和生物酶方法裂解、去蛋白、去RNA以及鹽析沉淀來達到純化革蘭氏陽性細菌基因組DNA的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種革蘭氏陽性細菌DNA樣品的制備。產品即到即用，性能穩定，操作方便，提取效率和純化程度高。

技術背景

采用多種生物酶聯合使用，使革蘭氏陽性細菌，例如Bacillus subtilis、 Listeria monocytogenes、Staphylococcus aureus、Staphylococcus epidermidis、Streptococcus mutans等（包括帶有菌絲體和孢子的鏈霉菌種）更容易裂解，同時有效地使細菌中核酶、PCR反應抑制劑失活，其DNA提取效率和純度俱佳。

產品內容

緩沖液（Reagent A）  25毫升

酶解液I（Reagent B）        1毫升

裂解液A（Reagent C）   1毫升

裂解液B（Reagent D）   3毫升

酶解液II（Reagent E）     100微升

酶解液III（Reagent F）     200微升

萃取液（Reagent G）  6毫升

濃縮液（Reagent H）  2毫升

沉淀液（Reagent I）      20毫升

清理液（Reagent J）      20毫升

保存液（Reagent K）     1毫升

產品說明書                     1份

保存方式

保存酶解液I（Reagent B），酶解液II（Reagent E），酶解液III（Reagent F）和萃取液（Reagent G）在－20℃冰箱里；裂解液A（Reagent C）保存在室溫下；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

37℃和65℃恒溫水槽：用于樣品孵育

微型臺式離心機：用于沉淀細菌和核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻反應物

實驗步驟

實驗開始前，開啟恒溫水槽，并設置溫度分別為37℃和65℃。然后開始下列操作：

• 加入1毫升新鮮菌液到1.5毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升緩沖液（Reagent A）
• 渦旋震蕩，充分混勻細菌顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心抽去上清液
• 加入100微升緩沖液（Reagent A）
• 加入50微升酶解液I（Reagent B）
• 渦旋震蕩，充分混勻細菌顆粒群
• 放進37℃恒溫水槽孵育2小時
• 加入35微升裂解液A（Reagent C）
• 加入120微升裂解液B（Reagent D），充分混勻
• 放進65℃恒溫水槽孵育3分鐘
• 置入冰槽10分鐘
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
• 加入5微升酶解液II（Reagent E），充分混勻
• 放進37℃恒溫水槽孵育30分鐘
• 加入10微升酶解液III（Reagent F），充分混勻
• 放進65℃恒溫水槽孵育15分鐘，其間每間隔5分鐘，渦旋震蕩3秒
• 置于室溫下冷卻
• 加入300微升萃取液（Reagent G）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管
• 加入100微升濃縮液（Reagent H）
• 加入800微升沉淀液（Reagent I）
• 上下傾倒混勻

30． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）

• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent J）
• 放進微型臺式離心機離心3分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入40微升保存液（Reagent K）
• 放進4℃冰箱里過夜備用或即刻進行后續操作

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 酶解液III（Reagent F）可以放進37℃恒溫水槽少許時間，使其凍融
• 本產品采用特殊酶解法，更為有效地提取基因組DNA
• 建議使用足夠的起始細菌量
• 每毫升細菌可以獲得3至9微克不等的基因組DNA
• 本公司提供系列細菌技術產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定提取效率和純化程度高