冰凍切片乙酰膽堿脂酶活性染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

冰凍切片乙酰膽堿脂酶活性染色試劑是一種旨在使用水解底物硫代膽堿，還原鐵氰化物，與銅離子反應，形成紅色或棕色不溶性產物，來分析冰凍組織樣品中乙酰膽堿脂酶活性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統Karnovsky的銅-鐵氰化物方法、成功實驗證明的。主要適用于動物組織細胞的乙酰膽堿脂酶活性的定性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

乙酰膽堿脂酶（acetylcholinesterase；AChE）是四聯體絲氨酸水解酶（serine hydrolase）存在于人體大腦皮質（cortex）的軸突（axons）和錐體細胞（pyramidal cell）中。突觸傳遞（synaptic transmission）釋放出乙酰膽堿，在乙酰膽堿脂酶的作用下，產生降解，并達到膽堿能傳遞（cholinergic transmission）。乙酰膽堿脂酶還參與神經細胞分化，神經生長（neurite extension），形態形成，膜激感性（excitability）和通透性調節，蛋白溶解等過程。乙酰膽堿脂酶催化乙酰膽堿的水解，產生膽堿和醋酸鹽。膽堿能神經細胞的進行性缺失，是阿茲罕默病的特點，導致認知障礙和記憶喪失。基于乙酰膽堿脂酶催化底物乙酰膽堿的水解，產生硫代膽堿（thiocholine），還原鐵氰化物（ferricyanide），與銅離子發生反應，形成棕色沉淀復合物，用于定位組織細胞中乙酰膽堿脂酶的活性。

產品內容

清理液（Reagent A）   50毫升

染色液（Reagent B）   10毫升

反應液（Reagent C）    1毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）和反應液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養箱：用于反應孵育

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取900微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入100微升反應液（Reagent C），混勻后，標記為染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進行下列操作。

• 取出待測的10微米厚的冰凍組織切片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升 染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 放進37℃培養箱里孵育60分鐘，避免光照
• 小心移去切片上的染色工作液
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
• （選擇步驟）復染（建議使用蘇木素復染試劑盒－80067）
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在光學顯微鏡下觀察和計數：表達乙酰膽堿脂酶活性的組織細胞為陽性組織細胞，呈現紅色或棕色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 染色液（Reagent B）和反應液（Reagent C）避免反復凍融
• 建議使用未經固定的冰凍切片樣品
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態下進行
• 染色孵育時間，根據樣品和酶活性強弱調整，通常為15分鐘至2小時
• 肌肉組織樣品通常染色孵育時間為2小時
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰