冰凍切片組織堿性磷酸酶活性染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI冰凍切片組織堿性磷酸酶活性染色試劑是一種旨在使用偶聯(lián)偶氮技術(shù)，在底物存在的情況下，分析組織樣本中堿性磷酸酶表達，而呈現(xiàn)亮紅色沉淀現(xiàn)象的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于動物組織冰凍切片，同時也適合原生代或培養(yǎng)細胞的酶活性檢測。尤其可用于骨組織病理生理的研究和干細胞分化能力的鑒定。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

技術(shù)背景

堿性磷酸酶（ALKALINE PHOSPHATASE）在堿性環(huán)境下催化各種醇和酚的磷酸酯水解，存在于活躍運輸?shù)哪ど希�如毛細血管及毛細血管的動脈部分的內(nèi)皮，腎近曲小管壁邊緣和小腸上皮的紋狀緣，胎盤組織，未分化的干細胞等表達含量最為豐富。它與骨質(zhì)的形成，維持細胞內(nèi)磷酸酶的濃度，以及與經(jīng)膜吸收和轉(zhuǎn)運過程有關(guān)。偶聯(lián)偶氮技術(shù)的基本原理為堿性磷酸酶水解底物（磷酸萘酯）釋放出萘酚，立即為重氮鹽所捕獲而成為不溶性有色的偶氮染料。實驗最初（1944）應(yīng)用β-萘磷酸鹽作為底物，釋放出的萘酚與重氮α-萘胺偶聯(lián)，在酶的活動處形成有色沉淀。Burstone （1962）推薦使用替代萘酚，如萘酚AS-MX磷酸鹽。重氮鹽有很多種，但較適宜的有Fast blue RR，F(xiàn)ast red TR，F(xiàn)ast violet B，F(xiàn)ast blue VRT 和Fast black B。偶聯(lián)偶氮技術(shù)孵育時間短；穩(wěn)定，靈敏；在正常組織中因無萘酚，故不需要對照；反應(yīng)產(chǎn)物為偶氮染料難以溶解，不易彌散因而圖象清晰。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI清理液（Reagent A）  毫升

YIJI固著液（Reagent B）  毫升

YIJI反應(yīng)液（Reagent C）  毫升

YIJI染色液（Reagent D）  管

產(chǎn)品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保證6月

用戶自備

甲基綠復染試劑盒（YIJI40010）或蘇木素復染試劑盒（YIJI80050）：用于常規(guī)染色后復染

小型染色缸：用于染色操作

光學顯微鏡：用于組織細胞染色后觀察分析

實驗步驟

樣本染色操作開始前，將試劑盒里的YIJI反應(yīng)液（Reagent C）和YIJI染色液（Reagent D）置于室溫下預(yù)熱，并避光。然后移取xx毫升YIJI反應(yīng)液（Reagent C）到YIJI染色液（Reagent D）管里，充分混勻后，標記為YIJI染色工作液，即刻使用。

• 樣本固著處理

• 取出待測的5至10微米厚的冰凍組織切片或細胞載玻片
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在切片或載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升－20℃預(yù)冷的YIJI固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 放進－20℃冰箱里，孵育5分鐘
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI固著液（Reagent B）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升YIJI染色工作液，鋪滿整個切片或載玻片樣品表面
• 室溫下暗室里孵育30至60分鐘；或直至可見紅色
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI染色工作液
• 室溫下，小心將切片或載玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去切片或載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

• 樣本復染處理（選擇步驟）

• 樣本復染處理（甲基綠或蘇木素）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：酶活性細胞呈現(xiàn)粉紅或紅色，背景黃色，核為藍色

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時，須帶手套
• YIJI染色工作液配制后，5分鐘內(nèi)使用，不得久置
• YIJI染色工作液根據(jù)需要配制，每管可以染色10個樣本
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• YIJI固著液（Reagent B）須－20℃預(yù)冷
• 如果樣品中酶活性較低，細胞染色可以在37℃環(huán)境下進行
• 組織細胞染色注意不要過度
• 直接封片處理，不要使用有機溶劑（乙醇、二甲苯等），否則會使染色褪色
• 組織細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰