石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）舒爾茨直接染色試劑盒

產品說明書（中文版）

主要用途

石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）舒爾茨直接染色試劑是一種旨在通過特殊脫蠟處理和毛地黃皂苷特異性與游離膽固醇反應產生的不溶性產物，進而使用鐵礬氧化和混合酸還原，形成短暫性藍綠色顯色，分析石蠟包埋組織切片中（最大程度保留的）游離膽固醇的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良舒爾茨經典方法、成功實驗證明的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片中游離膽固醇的特異檢測。廣泛用于組織病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色敏感。

技術背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。毛地黃皂苷（digitonin）與游離膽固醇反應產生不溶性復合物，通過脂溶性有機溶劑分離出游離膽固醇，然后通過舒爾茨（Schultz Reaction）染色技術，即鐵礬氧化和混合酸還原呈現針尖樣晶體狀藍藍色色素沉積。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的膽固醇成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以最大程度保護組織中的膽固醇成分是舒爾茨染色的關鍵。

產品內容

脫蠟液（Reagent A）          毫升

凈化液（Reagent B）   毫升

清理液（Reagent C）   毫升

沉淀液（Reagent D）   毫升

萃取液（Reagent E）   毫升

氧化液（Reagent F）   毫升

強化液（Reagent G）   毫升

穩定液（Reagent H）   毫升

染色液（Reagent I）   毫升

產品說明書   1份

保存方式

保存沉淀液（Reagent D）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；氧化液（Reagent F），避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月 

用戶自備

培養箱：用于樣品反應孵育

光學顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析

實驗步驟

一、樣品脫蠟處理

• 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上xx微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 重復實驗步驟4至6一次
• 小心加上xx微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）
• 小心加上xx微升沉淀液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2小時（注意：避免干枯）
• 小心移去載玻片上的沉淀液（Reagent D）
• 小心加上xx微升萃取液（Reagent E）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育1小時（注意：避免干枯）
• 小心移去載玻片上的萃取液（Reagent E）
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent C）

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升氧化液（Reagent F），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 37℃濕潤培養箱孵育4小時，避免光照和干化
• 小心移去載玻片上的氧化液（Reagent F）
• 小心加上xx微升強化液（Reagent G）
• 室溫下孵育20分鐘
• 小心移去載玻片上的強化液（Reagent G）
• 重復實驗步驟4至6二次
• 小心加上xx微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent C）
• 小心加上xx微升穩定液（Reagent H）
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的穩定液（Reagent H）
• 空氣中晾干
• 小心加上xx微升預冷的染色液（Reagent I），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 即刻放上蓋玻片
• 在一般光學顯微鏡下觀察：游離膽固醇陽性呈現藍綠色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 試劑含有腐蝕性酸性物質，注意操作安全
• 操作時，須戴手套
• 操作時，避免污染母液
• 建議使用玻璃染色缸，除說明書規定之外
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 染色后數分鐘至數小時，切片藍綠色會褪色甚至消失
• 樣品染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細胞膽固醇染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰