Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI Bradford 蛋白質濃度定量試劑是一種旨在使用考馬斯亮藍染色劑G－250 與可溶性蛋白質特異性

結合產生色彩差異變化，通過比色測定其最大吸收轉換來定量蛋白質濃度的權威而經典的技術方法。該技

術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種蛋白質（動物、人體、植物、微生物等）的

含量檢測。產品即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測敏感，定量精確。

技術背景

考馬斯亮藍染料G－250（Coomassie Brilliant Blue G－250）是一種與蛋白質結合的化學染料。它的三苯甲

烷（triphenylmethane）基團，主要與蛋白質的非極性結構結合。而它的陰離子磺酸鹽（anion sulfonate）基

團與蛋白質分子的陽離子和芳香類氨基酸，尤其是精氨酸和賴氨酸側鏈的結合。在酸性環境下，其最大吸

收波長從465nm轉換為595nm。Bradford提出的方法的最大優點在于不受樣品中各種化學成分的干擾。較之

Lowry，Hartree-Lowry和 BCA技術，更為敏感。

產品內容

YIJI 反應液（Reagent A） 毫升

YIJI 標準液（Reagent B） 毫升

YIJI 補充液（Reagent C） 毫升

產品說明書 1 份

保存方式

保存YIJI 標準液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，YIJI 反應液（Reagent

A），避免光照；有效保證 6 月

用戶自備

48 孔板：用于樣品比色的容器

比色杯：用于樣品比色的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

實驗步驟

一、48 孔板微量測定

A．建立標準樣品曲線

1．將－20℃冰箱里試劑盒中的YIJI 標準液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．準備1 個48 孔板，做好相應的標記

1

3．按下表配制標準樣品反應液

1）分別移取適量的 YIJI 標準液（Reagent B）到 48 孔板里指定序號的樣品孔里

2）分別移取適量的 YIJI 補充液（Reagent C）到 48 孔板里指定序號的樣品孔里

3）最后分別加入 100 微升 YIJI 反應液（Reagent A）

序號 YIJI 標準液 YIJI 補充液 YIJI 反應液 標準樣品蛋白質含量

（Reagent B） （Reagent C） （Reagent A） （微克）

1 25 微升 375 微升 100 微升 25

2 12.5 微升 387.5 微升 100 微升 12.5

3 10 微升 390 微升 100 微升 10

4 5 微升 395 微升 100 微升 5

5 2.5 微升 397.5 微升 100 微升 2.5

6 1.25 微升 398.75 微升 100 微升 1.25

7 0 400 微升 100 微升 0

4．輕輕搖動 48 孔板，混勻反應物

5．室溫下暗室里孵育 5 分鐘

6．即刻放進分光光度酶標儀測定：波長為 595nm

7．繪制蛋白質濃度標準曲線：縱座標（Y）為吸光值 OD₅₉₅，橫座標（X）為蛋白質含量（微克）

B．樣品測定

1．將待測樣品置入冰槽里融化

2．分別移取 100 微升待測樣品到 48 孔板里指定序號的樣品孔里（注意：參見注意事項 4）

3．分別移取 300 微升 YIJI 補充液（Reagent C）到 48 孔板里指定序號的樣品孔里

4．最后分別加入 100 微升 YIJI 反應液（Reagent A）

5．輕輕搖動 48 孔板，混勻反應物

6．室溫下暗室里孵育 5 分鐘

7．即刻放進分光光度酶標儀測定：波長為 595nm

8．根據上述標準曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以 100 微升（樣品量），獲得待測樣品的實際濃度

（微克/微升）（注意：參見注意事項 5）

二、比色杯標準測定

A．建立標準樣品曲線

1．將－20℃冰箱里試劑盒中的 YIJI 標準液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．準備好 1 毫升比色杯

3．按下表配制標準樣品反應液

1）分別移取適量的 YIJI 標準液（Reagent B）到 1 毫升比色杯

2）分別加入適量的 YIJI 補充液（Reagent C）

3）最后分別加入 200 微升 YIJI 反應液（Reagent A）

序號 YIJI 標準液 YIJI 補充液 YIJI 反應液 標準樣品蛋白質含量

（Reagent B） （Reagent C） （Reagent A） （微克）

1 50 微升 750 微升 200 微升 50

2 25 微升 775 微升 200 微升 25

3 20 微升 780 微升 200 微升 20

4 10 微升 790 微升 200 微升 10

2

5 5 微升 795 微升 200 微升 5

6 2.5 微升 797.5 微升 200 微升 2.5

7 0 800 微升 200 微升 0

4．輕輕上下傾倒比色杯，混勻反應物

5．室溫下暗室里孵育 5 分鐘

6．即刻放進分光光度酶標儀測定：波長為 595nm

7．繪制蛋白質濃度標準曲線：縱座標（Y）為吸光值 OD₅₉₅，橫座標（X）為蛋白質含量（微克）

B．樣品測定

1．將待測樣品置入冰槽里融化

2．移取 200 微升待測樣品到 1 毫升比色杯里 （注意：參見注意事項 4）

3．加入 600 微升 YIJI 補充液（Reagent C）

4．加入 200 微升 YIJI 反應液（Reagent A）

5．輕輕上下傾倒比色杯，混勻反應物

6．室溫下暗室里孵育 5 分鐘

7．即刻放進分光光度酶標儀測定：波長為 595nm

8．根據上述標準曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以 200 微升（樣品量），獲得待測樣品的實際濃度

（微克/微升）（注意：參見注意事項 5）

三、玻璃管大量測定（注意：參見注意事項 2）

A．建立標準樣品曲線

1．將－20℃冰箱里試劑盒中的 YIJI 標準液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．準備好 5 毫升玻璃管

3．按下表配制標準樣品反應液

1）分別移取適量的 YIJI 標準液（Reagent B）到 5 毫升玻璃管

2）分別加入適量的 YIJI 補充液（Reagent C）

3）最后分別加入 1 毫升 YIJI 反應液（Reagent A）

序號 YIJI 標準液 YIJI 補充液 YIJI 反應液 標準樣品蛋白質含量

（Reagent B） （Reagent C） （Reagent A） （毫克）

1 4 毫升 0 1 毫升 4

2 2.5 毫升 1.5 毫升 1 毫升 2.5

3 2 毫升 2 毫升 1 毫升 2

4 1 毫升 3 毫升 1 毫升 1

5 0.5 毫升 3.5 毫升 1 毫升 0.5

6 0.25 毫升 3.75 毫升 1 毫升 0.25

7 0 4 毫升 1 毫升 0

4．渦旋震蕩，混勻反應物

5．室溫下暗室里孵育 30 分鐘

6．即刻放進分光光度酶標儀測定：波長為 595nm

7．繪制蛋白質濃度標準曲線：縱座標（Y）為吸光值 OD₅₉₅，橫座標（X）為蛋白質濃度（毫克）

B．樣品測定

1．將待測樣品置入冰槽里融化

2．移取 250 微升待測樣品到 5 毫升玻璃管里

3

3．加入 3.75 毫升 YIJI 補充液（Reagent C）

4．加入 1 毫升 YIJI 反應液（Reagent A）

5．渦旋震蕩，混勻反應物

6．室溫下暗室里孵育 30 分鐘

7．即刻放進分光光度酶標儀測定：波長為 595nm

8．根據上述標準曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以 0.25 毫升（樣品量），獲得待測樣品的實際濃

度（毫克/毫升）

注意事項

1． 本產品為 200 次（96 孔板測定），100 次操作（48 孔板測定），50 次操作（比色杯測定）包括標準曲線

2． 玻璃管大量測定須另購 YIJI Bradford 大量蛋白質濃度定量試劑盒（YJ30030.2）

3． 操作時，須戴手套

4． 建議用戶使用 48 孔板微量測定時樣品和試劑的用量，以及在最后濃度計算時的除數

序號 待測樣品 YIJI 補充液 YIJI 反應液 蛋白濃度計算的除數

（Reagent C） （Reagent A）

1 5 微升 395 微升 100 微升 5

2 50 微升 350 微升 100 微升 50

3 100 微升 300 微升 100 微升 100

4 250 微升 150 微升 100 微升 250

如果是 96 孔板測定：待測樣品、YIJI 補充液（Reagent C）和 YIJI 反應液（Reagent A）的用

量是 48 孔板測定的二分之一

如果是比色杯測定：待測樣品、YIJI 補充液（Reagent C）和 YIJI 反應液（Reagent A）的用

量是 48 孔板測定的 2 倍

5． 樣品濃度計算公式：

標準曲線求得蛋白含量（微克）÷樣品量（微升）＝微克/微升

6． 加樣后即刻比色測定

7． 比色測定后，比色杯須清洗徹底

8． 強堿性樣品將會干擾比色檢測

9． 下列化學成分和濃度范圍不會干擾比色檢測：

Acetate 0.6 M KCI 1.0 M

Acetone Malic acid 0.2 M

Adenosine 1 mM MgCl₂ 1.0 M

Amino Acids Mercaptoethanol 1.0 M

Ammonium sulfate 1.0 M MES 0.7 M

Ampholytes Methanol 0.5％

Acid MOPS 0.2 M

ATP 1 mM NaCl 5 M

Barbital NAD 1 mM

BES 2.5 M NaSCN 3 M

Boric acid Peptones

Cacodylate-Tris 0.1 M Phenol 5%

CDTA 0.05 M Phosphate 1.0 M

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