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產品描述

Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養(yǎng)專用)是專門用于快速檢測細胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。本試劑盒操作簡單，反應時間短，只需吸取1 μl細胞培養(yǎng)上清加入反應體系中，60℃孵育1h，肉眼觀察即可判定結果，與傳統(tǒng)檢測支原體的PCR法優(yōu)勢明顯。本試劑盒檢測范圍廣，可以檢測：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細胞的支原體(注：M.為Mycoplasma的縮寫)。以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上。絕大多數支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細胞生物學相關的科研實驗室及企業(yè)的日常支原體檢測。

保存方法

-20℃保存。

使用方法

1.待測細胞培養(yǎng)上清收集

對于貼壁細胞，待測的樣品最好來源于至少培養(yǎng)三天以上且匯合度在70-90%左右的細胞培養(yǎng)上清，中途不再換液，此時上清中支原體含量較高，便于檢出，無需離心，直接吸取上清。對于懸浮培養(yǎng)的細胞，也需要在換液或者傳代后讓細胞生長3天以上，再取培養(yǎng)液進行檢測，也無需離心，哺乳動物細胞的存在不會影響檢測結果。

【注】：收集的待測細胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測，請放于-20℃或-80℃冰箱保存。樣品在-20℃至少可以保存一個月，在-80℃可以長期保存。

2.反應體系的配制

將溶液Ⅰ、Ⅲ從-20℃冰箱中取出，室溫放置待其融化，液態(tài)溶液Ⅱ需一直置于冰上備用。溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000 rpm離心30 s，用移液槍吹洗均勻。三種試劑按表1比例混合，吹打均勻后，按每管24 μL 的量分裝到0.2 mL透明度良好的薄壁PCR管中。接著，往陽性對照管(Positive)中加入1 μL 陽性支原體DNA，往陰性對照管(Negative)中加入1 μL 無菌水，往測試管(Test)中加入1 μL 待測細胞培養(yǎng)液，反應液的總體積為25 μL。

【注】：裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前，用迷你離心機離心下；進行反應體系配制的房間，與進行樣品前處理、加陽性對照DNA、樣品DNA的房間最好分開。

表1：恒溫反應體系的配制

【注】：每次實驗加上一個陰性對照、一個陽性對照，便于結果的判斷和分析。如有多個樣品，為了避免移液時損失，分裝時建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數1.08，保證每個反應管中的反應液足量。

3. 反應

PCR儀設置程序：61℃，60 min，熱蓋溫度，100 ℃。

【注】：若實驗室所沒有PCR儀，反應也可以在水浴鍋中進行，需要在每管中加入25 μL礦物油，以防止液體蒸發(fā)導致結果不準確。水浴鍋顯示溫度與實際溫度的溫差最好不超過0.5℃，放入已經升溫到61℃的水浴內，準確反應60 min。

4. 結果判斷

61℃反應60 min后，立刻取出反應管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應管溶液顏色的變化，即可判斷檢測結果。如果溶液為藍綠色，則說明有支原體污染；如果為紫紅色，則說明沒有支原體污染(如圖1)。顏色反應如下圖所示，也可以以陰性對照與陽性對照作為參考。

【注】：在61℃反應的時間必須準確計時，最多不得超過5 min，以免出現假陽性。反應產物不可開蓋，防止產生氣溶膠會導致假陽性的出現，必須在反應后2 h 內進行結果判斷，避免室溫下擴增反應進行，影響結果判別。在少數情況下(如支原體含量較低)，溶液顏色可能會介于紫色和天藍色之間，此時可將反應時間繼續(xù)延長到80 min，如果顏色變?yōu)樗{色，則判定為陽性，否則為陰性。
 

注意事項

1．必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作。整個操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。

2．最好使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應該使用新開封的吸頭。

3．檢測過程中，用過的各類吸頭、離心管務必小心處理，應裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶內。反應后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠離細胞房的獨立垃圾桶內。

4．如果細胞被支原體污染，可以選購本公司或其他供應商提供的去除試劑盡早去除。

表2：Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細胞培養(yǎng)專用)的優(yōu)勢