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質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
Lysyl Endopeptidase
本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶，該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽，可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸基團的多肽，增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內消化。
來源：細菌
外觀：凍干粉（包含２ mmol/L Tris-HCl 緩沖液，pH８）
活性：0.03～0.07 AU/vial
分子量：27,000（瓊脂糖過濾），30,000（SDS-PAGE）
溶解性：溶于水或緩沖液
穩定性：溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中，可在４℃穩定保存２年；在 pH 值 6.0-11.0、30℃時能穩定保存，但溫度超過50℃時不穩定。
最適pH值：9.0~9.5
等電點：6.9~7.0
底物特異性：
可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA
抑制劑：DFP、PMSF、TLCK
◆特點
● 高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析
● 提高裂解效率、增加肽段數量
● 根據使用量特意制備小包裝，方便使用
◆應用
分別采用胰蛋白酶（Tp）、賴氨酰肽鏈內切酶（Lys-C）和 Tp與Lys-C 聯用進行膠內酶切的效果比較。
牛血清蛋白 BSA 的條帶（100 ng）通過 SDS-PAGE 獲得，然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進行酶切，再用 MALDI-TOFMS 法進行分析。
這些蛋白酶的實驗效果見下表。
表 1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照
這些結果表明 Lys-C 酶解的錯誤裂解率最低。Tp 酶解時加入 Lys-C 后，錯誤裂解率有所降低，同時，可以鑒定出更多的多肽。
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Tp |
Lys-C |
Lys-C+Tp |
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裂解位點 |
精氨酸和賴氨酸的Ｃ端 |
賴氨酸的Ｃ端 |
精氨酸和賴氨酸的Ｃ端 |
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錯誤裂解率 (錯誤裂解所占比例 ) |
多（８%） |
很少（０%） |
少（３%） |
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鑒定出的多肽數量 |
１７ |
１９ |
２２ |
胰蛋白酶（Tp）（圖 ａ）和賴氨酰肽鏈內切酶（Lys-C）+Tp（ 圖 ｂ）酶切后的質譜結果對照圖。
Lys-C+Tp 酶切后，可以在 m/z=2000 時得到吸收峰，而單獨的 Tp 酶切在 m/z=2000 時沒有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。
( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Ｙ. Wada 博士提供 )
賴氨酰肽鏈內切酶
賴氨酰肽鏈內切酶，最初由 Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基Ｃ末端和Ｓ-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩定性高，在４Ｍ尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育６小時之后，仍然擁有完整的生物活性。
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外觀 |
凍干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8） |
活性 |
見包裝 |
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分子量 |
27,000（凝膠過濾）；30,000 (SDS-PAGE) |
溶解性 |
易溶于水或緩沖液 |
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最佳pH |
9.0-9.5（酰胺酶的最佳活性 pH） |
等電點 |
6.9-7.0 |
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抑制劑 |
DFP、PMSF、TLCK |
來源 |
細菌 |
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穩定性 |
溶于pH 值 5.0-12.0 的緩沖液中，可于４℃穩定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的緩沖液中，可于30℃穩 定保存，但是50℃及以上不穩定。 |
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單位定義 |
一單位酰胺酶（AU）指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生１ μmol 對硝基苯胺所需的酶量。 |
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底物特異性 |
水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA |
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非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA |
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◆產品列表
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產品編號 |
產品名稱 |
等級 |
規格 |
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賴氨酰肽鏈內切酶，MS級 Lysyl Endopeptidase, MS Grade |
質譜級 |
20μg×5 |
