品系名稱：B6/JGpt-H11^{em1Cin(CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)}/Gpt

簡(jiǎn)稱：B6-G/R

品系類型：Knock-in

品系編號(hào)：T006163

背景：C57BL/6JGpt

在生物學(xué)研究中，可以利用熒光蛋白將某些需要研究的細(xì)胞與錯(cuò)綜復(fù)雜的背景區(qū)分開(kāi)來(lái)。通過(guò)光學(xué)成像對(duì)它們進(jìn)行觀察和定量分析，同時(shí)研究它們?cè)跁r(shí)間與空間上的特性；在另一個(gè)層次上，也可以將GFP表達(dá)在特定的細(xì)胞中，來(lái)觀察這些細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和行為。

我們將綠色熒光蛋白ZsGreen與紅色熒光蛋白tdTomato相結(jié)合，同時(shí)敲入到鼠源的H11基因位點(diǎn)。正常情況下，小鼠全身表達(dá)ZsGreen而可激發(fā)出耀眼的綠光，可以照亮各種細(xì)胞、組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，因此，小鼠剛出生時(shí)候是全身泛綠，與眾不同。但我們?cè)赯sGreen兩側(cè)埋設(shè)了loxP位點(diǎn)，當(dāng)Cre重組酶存在時(shí)，小鼠基因組中的ZsGreen會(huì)被刪除，開(kāi)啟tdTomato的表達(dá)，可發(fā)出眩目的紅光。由于Cre是可以組織特異性表達(dá)的，而小鼠跟隨Cre的表達(dá)時(shí)間和位置開(kāi)啟紅光。

本模型可利用Cre/loxP位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞命運(yùn)進(jìn)行追蹤展示，揭示特定類型細(xì)胞在發(fā)育、疾病中的再生、自我更新、分化過(guò)程。雙熒光報(bào)告基因系統(tǒng)提供zsGreene及tdTomato兩種熒光標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)了重組/非重組細(xì)胞的實(shí)時(shí)檢測(cè)，因此，本模型也是一種示蹤特異性Cre表達(dá)位置的理想工具。

1.示蹤C(jī)re的表達(dá)

2.組織、細(xì)胞標(biāo)記

圖1 B6-G/R小鼠綠色熒光蛋白表達(dá)檢測(cè)。B6-G/R小鼠，取其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎、腦、肌肉、皮膚、胰腺等組織切片后，在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。

結(jié)果顯示：可觀察到B6-G/R小鼠各組織橫切面均有綠色熒光表達(dá)。

結(jié)果表明：B6-G/R小鼠主要組織能夠表達(dá)ZsGreen熒光蛋白。

2.B6-G/R小鼠表達(dá)紅色熒光蛋白檢測(cè)

圖2 B6-G/R小鼠紅色熒光表達(dá)檢測(cè)。使用B6-G/R小鼠與Cre配繁，當(dāng)其后代小鼠的細(xì)胞中Cre重組酶存在時(shí)，小鼠基因組中的ZsGreen會(huì)被刪除，開(kāi)啟tdTomato的表達(dá)，發(fā)紅色熒光，對(duì)照鼠為B6-G/R，發(fā)綠色熒光。 取小鼠主要組織切片后，在熒光顯微鏡下觀察紅色熒光蛋白和綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。

結(jié)果顯示：可觀察到B6-G/R與Cre配繁產(chǎn)生的后代，表達(dá)Cre的組織細(xì)胞橫切面均有紅色熒光表達(dá)，而對(duì)照組只有綠色熒光蛋白的表達(dá)。

結(jié)果表明：B6-G/R小鼠與表達(dá)Cre重組酶的小鼠配繁后，能刪除FLOX區(qū)域，開(kāi)啟tdTomato的表達(dá)（Cre-為B6-G/R小鼠簡(jiǎn)寫；Cre+為B6-G/R與CAG-cre交配后代小鼠簡(jiǎn)寫。200倍鏡下熒光圖片）。

1.Muzumdar MD; Tasic B; Miyamichi K; Li L; Luo L. 2007. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis 45(9):593-605.