腸癌類器官培養基是一種為促進人源腸癌類器官體外形成和擴增而開發的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。該培養基的獨特配方可以提供一個合適的人源腸癌類器官體外培養環境，選擇性地促進體外人源腸癌類器官的生長。
1. 腸癌類器官培養
將獲取的腸癌原代細胞懸液計數，根據計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5 mL離心管中，補齊預冷的腸癌類器官培養基至所需體積，將預冷后的細胞懸液加入等體積的Matrigel(Corning)中輕輕混勻(全程冰上操作)，避免氣泡，使得腸癌原代細胞終濃度為5X105個細胞/毫升。然后將細胞與基質膠的混合液按照50-60 μL/孔呈半球形點膠于24孔板。將培養板放入5%CO2、37℃培養箱終至少30 min，待Matrigel完全凝固。沿孔壁每孔緩慢加入500 μL預先恢復至室溫的類器官培養基，置5%CO2、37℃培養箱培養。3天后鏡下觀察類器官形成情況，粒徑大于30~50 μm即認為類器官已經形成，每5天更換一次培養基進行培養，持續觀察類器官大小，鏡下觀察大部分類器官大小均大于30~50 μm且大小不再增大即可收集類器官進行后續實驗。
2. 腸癌類器官收集
棄培養基，每孔加入500 μL預冷DF12，反復吹打至基質膠完全脫離板底，收集至15 mL離心管中，1500 rpm離心5 min，輕輕吸去上清和基質膠層，待用。
3. 腸癌類器官傳代
收集的類器官，加入3-5 mL類器官解離試劑（PRS-ODR），37℃，200 rpm水平搖床振蕩消化（具體時間根據類器官大小和數量決定，以肉眼可見顆粒明顯減小一半為準，可中間取消化的類器官顯微鏡觀察，類器官消化至包含有3~10個細胞的細胞團塊最佳）；消化完全后采用等體積的含10% FBS的DMEM培養基終止消化。1500 rpm離心3 min，棄上清，使用清洗液重懸沉淀后1500 rpm再次離心3 min；加入預冷的胃癌類器官培養基進行重懸，計數，按照培養步驟操作繼續培養。
