茜素紅S是一種蒽醌類衍生物，能和多種金屬離子螯合生成穩定的橙紅色或深紅色的復合物，是一種良好的金屬指示劑，也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑，還可作為酸堿指示劑，或用于極譜法測定金屬離子。

針對不同樣品特點，全新推出一系列茜素紅S染色液產品，利用染色液酸堿性和濃度的區別，可以分別對細胞外基質鈣質沉積、細胞內鈣質沉積和成骨細胞礦化結節鈣質進行染色，方便您根據實際需求進行選購。
染色原理：
茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復合物，常用于染色或定位組織中的鈣質沉積。其中酸性染色液適用于骨、軟骨等細胞外基質鈣質沉積染色；細胞內鈣質沉積量比較少，酸性染色液可能會使鈣質溶解，導致染色效果差甚至假陰性，因此一般采用堿性染色液，同時堿性染色液可以增加染色時間，從而獲得比較滿意的染色效果。

染色效果：

圖1. 茜素紅S染色液(2%, pH4.2)用于小鼠尾椎骨石蠟切片的染色效果圖。如圖所示，鈣鹽沉積處顯橙紅色。注：實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

圖2. 茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3)用于MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)細胞誘導分化后的染色效果圖。如圖所示，鈣鹽沉積處顯紫紅色。注：實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

圖3. 成骨細胞礦化結節染色試劑盒(茜素紅S法)用于MC3T3-E1細胞誘導分化后的染色效果圖。如圖所示，經本試劑盒染色后，MC3T3-E1細胞礦化結節鈣鹽沉積處顯橙紅色。實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。
 

成骨細胞礦化結節染色試劑盒(茜素紅S法) (Alizarin Red S Staining Kit for Osteogenesis)，也稱成骨檢測試劑盒(Osteogenesis Assay Kit)，是一種基于茜素紅S螯合鈣離子(Ca²⁺)生成橙紅色復合物，以檢測成骨細胞礦化結節的染色試劑盒。

人體和動物的骨組織在生命過程中不斷地進行著重建，骨重建過程包括骨的分解吸收與新骨的形成。破骨細胞(osteoclasts)負責骨分解與吸收，而成骨細胞(osteoblasts, OB)是骨形成的主要功能細胞，負責新骨形成。在成骨分化過程中，其基本的生物學特征是骨基質合成、分泌、礦化及成熟。成骨細胞首先合成I型膠原(collagen-I, COL-I)、骨鈣素(osteocalcin, OC)、骨橋蛋白(osteopontin, OPN)等胞外基質，并通過基質小泡釋放鈣離子和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)等酶類物質，鈣離子在堿性磷酸酶作用下沉淀在膠原纖維絲上，完成基質礦化過程，最終形成骨組織。I型膠原從增殖期開始表達，基質合成期達巔峰；堿性磷酸酶是成骨細胞分化的早期標志物，骨基質合成期開始出現，礦化期達巔峰；骨鈣素是成骨細胞分化成熟的標志，一般礦化早期開始表達，礦化結節成熟后達巔峰。礦化結節是成骨細胞分化成熟的標志，同時也是成骨細胞行使成骨功能的主要形態學特征，觀察成骨細胞的礦化結節是研究成骨細胞分化的常用技術方法之一。

茜素紅S染色是一種常用的染色方法，廣泛用于成骨細胞分化、骨細胞或組織病理生理的研究。茜素紅S (Alizarin Red S, 簡稱ARS)，別名茜素磺酸鈉、茜素胭脂紅，CAS號為130-22-3，分子式為C₁₄H₇NaO₇S，分子量為342.25。茜素紅S是一種蒽醌類衍生物，能和多種金屬離子螯合生成穩定的橙紅色或深紅色的復合物，是一種良好的金屬指示劑，也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑，還可作為酸堿指示劑，或用于極譜法測定金屬離子。在組織學和組織病理學中，由于茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復合物，而常用于染色或定位組織中的鈣質沉積。

本試劑盒中茜素紅S染色液的茜素紅S濃度經過優化，呈酸性，可以通過螯合成骨細胞礦化結節中的鈣離子，以判斷成骨細胞的分化情況。針對不同樣品的特點，研發了三種茜素紅S染色液，具體請參考下表選擇合適的染色液。

本產品用于MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)誘導分化的染色效果參考圖1。

圖1. 成骨細胞礦化結節染色試劑盒(茜素紅S法)用于MC3T3-E1細胞誘導分化后的染色效果圖。如圖所示，經本試劑盒染色后，MC3T3-E1細胞礦化結節鈣鹽沉積處顯橙紅色。實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

按照6孔板每孔使用1ml固定液和1ml茜素紅S染色液來計算，C0148S可以檢測50個樣品。
室溫避光保存，至少一年有效。保存條件：

注意事項：

首次使用固定液時，須特別注意加入40ml無水乙醇并混勻。由于固定液易揮發，使用完畢后請立即旋緊瓶蓋。

茜素紅S染色液的染色的最佳時間與樣品鈣離子的含量有關，一般情況下染色時間為30分鐘，可根據實際染色效果酌情增加或減少染色時間。

本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1.試劑盒的準備：
首次使用時，請在固定液中加入40ml的無水乙醇，并充分混勻后備用。固定液加入無水乙醇配制完畢后，室溫避光保存，至少一年有效。
2.樣品處理。
a.細胞誘導分化之后，去除培養液，用PBS (C0221A)洗滌1次。
b.固定液固定20分鐘。
c.PBS洗滌3次。
3.茜素紅S染色液染色。
a.加入適量茜素紅S染色液，均勻覆蓋細胞即可，室溫染色30分鐘。注：請根據實際染色效果調整染色時間。
b.蒸餾水充分洗滌，隨后即可在顯微鏡下觀察和拍照。