產品名稱:
堿性蛋白胨水管(10ml)
產品用途:
用于霍亂弧菌的選擇性增菌培養
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培養基的保質期各不相同。不同的標準中均有明確規定了保存的條件和保質期。培養基應保存在防止其成分發生變化的環境下,即應避光、干燥保存;如有必要,用保存于2℃~8℃冰箱中,或依據培養基要求的儲存條件進行保存。除標準規定或保質期驗證實驗的結果表明有較長的保質期外,通常平板保存不超過2周~4周,三角瓶和試管的保存不超過3個月~6個月。除標準規定或保質期驗證實驗的結果表明有較長的保質期外,含有不穩定添加成分的培養基應即配即用。對發生化學反應或含有不穩定物質的固體培養基也應即配即用,不可二次融化。實驗室應對貯存培養基的有效期進行規定。觀察培養基顏色變化,是否有蒸發/脫水情況,是否有微生物生長。當培養基發生這類變化時,應停止使用。在使用和進一步加熱前,應事先將培養基放置到室溫。使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據,如質量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養基時,應按照配方準確配制,記錄所有細節信息,如:培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便溯源。
堿性蛋白胨水管(10ml)相關瓊脂培養基的融化:培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間,避免過度加熱。培養基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min),以免玻璃容器發生破裂。融化后的培養基放人47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫,冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于培養基的類型、體積和在水在鍋里的分裝量。融化后的培養基應盡快使用,放置時間一般不超過4h。剩余的培養基凝固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基,應根據相關標準,縮短融化后放置的時間。將瓊脂培養基倒人類似檢測培養基使用的獨立容器中,插入溫度計,記錄并保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養基應將溫度調節到44℃~47℃,或按照相關標準調節溫度。水浴保溫的頂層培養基中依次加入測試增菌液0.1 mL(需活化時另加10%S9混合液o.5 mL),混勻,迅速傾入底層培養基上,轉動平板,使頂層培養基在底層分布均勻。平放固化后取無菌濾紙片(直徑約為6 mm),小心放在已固化的頂層培養基的適當位置上,用移液器取適量受試物(如10μL),點在紙片上,或將少量固體受試物結晶加到紙片或瓊脂表面;37℃培養48 h觀察結果。
堿性蛋白胨水管(10ml)相關菌種衰退的根本原因是有關基因的負突變。如果控制產量的基因發生負突變,則表現為產量下降;如果控制孢子生成的基因發生負突變,則產生孢子的能力下降。菌種在移種傳代過程中會發生自發突變。雖然自發突變的幾率很低(一般為10-6~10-9),尤其是對于某一特定基因來說,突變頻率更低。但是由于微生物具有極高的代謝繁殖能力,隨著傳代次數增加,衰退細胞的數目就會不斷增加,在數量上逐漸占優勢,最終成為一株衰退了的菌株。
此外,菌種衰退還有以下幾種原因:
1、表型延遲造成菌種衰退,表型延遲現象也會造成菌種衰退。如,在誘變育種過程中,經常會發現某菌株初篩時產量較高,進行復篩時產量卻下降了。
2、質粒脫落導致菌種衰退,質粒脫落導致菌種衰退的情況在抗生素生產中較多,不少抗生素的合成是受質粒控制的。當菌株細胞由于自發突變或外界條件影響(如高溫),致使控制產量的質粒脫落或者核內DNA和質粒復制不一致,即DNA復制速度超過質粒,經多次傳代后,某些細胞中就不具有對產量起決定作用的質粒,這類細胞數量不斷提高達到優勢,則菌種表現為衰退。
3、連續傳代,連續傳代是加速菌種衰退的一個重要原因。一方面,傳代次數越多,發生自發突變(尤其是負突變)的幾率越高;另一方面,傳代次數越多,群體中個別的衰退型細胞數量增加并占據優勢越快,致使群體表型出現衰退。
4、不適宜的培養和保藏條件,不適宜的培養和保藏條件是加速菌種衰退的另一個重要原因。不良的培養條件如營養成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等和保藏條件如營養、含水量、溫度、氧氣等,不僅會誘發衰退型細胞的出現,還會促進衰退細胞迅速繁殖,在數量上大大超過正常細胞,造成菌種衰退。
堿性蛋白胨水管(10ml)相關菌種的復蘇與傳代
1.以無菌操作方式開啟凍干菌種管,加入適量培養液(按菌種選擇培養液,如細菌選擇營養肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營養肉湯培養基),吹吸數次,使菌種融化分散。取含5.0 mL~10.0 mL相應培養液的試管,滴入少許菌種懸液,在適宜溫度下培養至規定時間(一般為36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h、黑曲霉菌為30 ℃± 1℃培養42 h~48 h),此為第1代培養物。
2.用接種環取第1代培養物,或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠,劃線接種于相應培養基平板(按菌種選擇培養基,如細菌選擇營養瓊脂培養基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂培養基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養基),在適宜溫度下培養至規定時間(一般為36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h、分枝桿菌36 ℃± 1℃培養72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養42 h~48 h),此為第2代培養物。
3.挑取第2代培養物中典型菌落,接種于相應培養基斜面或平板(按菌種選擇培養基斜面,如細菌選擇營養瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養基平板),在適宜溫度下培養至規定時間(一般為36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h、分枝桿菌36 ℃±1 ℃培養72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養42 h~48 h),此為第3代培養物。
4.取第3代培養物,接種于相應培養基斜面,在適宜溫度下培養至規定時間,此為第4代培養物。5.1.5 按上述方法培養至所需代數,傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數及傳代日期等基本信息。
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