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胃癌完全培養(yǎng)基是一種為促進(jìn)胃癌原代細(xì)胞體外生長(zhǎng)而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)等。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5% CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時(shí),pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方(定量和定性),可以提供一個(gè)合適的平衡營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進(jìn)體外人胃癌原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。
1.胃癌原代細(xì)胞培養(yǎng)
至少提前半小時(shí)使用稀釋后的Matrigel基質(zhì)膠預(yù)鋪培養(yǎng)瓶/板,使用前吸干基質(zhì)膠,用稀釋液潤(rùn)洗一遍。將分離并計(jì)數(shù)后的細(xì)胞懸液詳見說明書中細(xì)胞數(shù)量接種于培養(yǎng)瓶/板,補(bǔ)加完全培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養(yǎng)箱,37 ℃ 、5 % CO2條件培養(yǎng);原代細(xì)胞初次接種后2-3 天內(nèi)勿動(dòng)(利于細(xì)胞貼壁),第一次換液建議換半液。
2.胃癌原代細(xì)胞傳代
鏡下觀察細(xì)胞形成克隆,且匯合度80~90%時(shí)即可傳代;培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞,棄舊培養(yǎng)液,加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況;細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開始脫落時(shí)用原代細(xì)胞終止培養(yǎng)基終止消化,并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1500 rpm,3 min;棄上清,以1-2 mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,活細(xì)胞計(jì)數(shù),將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,補(bǔ)加完全培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養(yǎng)箱,37 ℃ 、5 % CO2條件培養(yǎng)。其他步驟同上。