人胚胎祖細胞株EN1克隆來源于已注冊的親代人胚胎干細胞系H9(WA09)(West et al, 2008)。它表達遠端同源HOX基因HOXA5,B8,C8。 在分化試劑ES-K5分化下,這株細胞表達在脈絡叢中表達的通道SLC7A10(因而在研究血腦屏障中有用)(Holboe et al, 2003), 還表達大麻素受體1(腦)(CNR1),及轉(zhuǎn)錄變異1 mRNA(在藥物篩選中有用),還表達原發(fā)性纖毛運動障礙蛋白1(PCDP1),Ras鳥嘌呤基釋放蛋白-3(RASGRP3)和細胞色素P450基因CYP3A7。在地塞米松的作用下,這株細胞在腎上腺髓質(zhì)中通過誘導PNMT的表達來調(diào)控腎上腺素的合成。和細胞株U31不同的是這株細胞不表達TH。
陽性mRNA標記:GJB2, KCNN2,CNR1,PNMT,PCDP1,RASGRP3,CYP3A7
產(chǎn)品信息
來源: 人胚胎祖細胞株EN1克隆來源于已在NIH注冊的親代人胚胎干細胞系H9(WA09)(West,M.D.et al,2008)
應用范圍:血腦屏障,藥物篩選
細胞數(shù):每管含有>500,000細胞, 冷凍保存在1mL含10%DMSO的胎牛血清(FBS)中。
推薦生長培養(yǎng)基:ES-M40
推薦培養(yǎng)環(huán)境:細胞應培養(yǎng)在有0.1%明膠涂層的組織培養(yǎng)級別的聚苯乙烯的培養(yǎng)皿上。快速融解,隨后用培養(yǎng)基緩慢稀釋,細胞最初的接種密度應該是大約20,000細胞/cm2。細胞應培養(yǎng)在37℃的5%CO2和5%O2可增濕培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)基每周至少更換兩次。對常規(guī)的培養(yǎng),在細胞長匯合后,按1:3的比例進行傳代。
注意:生長匯合后超過兩天,不傳代將會導致細胞的終末分化。
可用分化培養(yǎng)基:
分化培養(yǎng)基:ES-K5
細胞群體倍增時間:大約50個小時
細胞群體倍增:細胞株EN1在12代出售(最初從長匯合1.9cm2細胞培養(yǎng)皿中分離出的克隆設為P1),以1.9cm2細胞培養(yǎng)皿記,其對應大約15倍增,以原始的培養(yǎng)記,其對應大約31.5倍增。在體外,這株細胞有有限的細胞周期,在大約70個細胞群體倍增時停止生長。在正確的使用情況下,這株細胞可以擴增至少10個群體倍增。
質(zhì)量控制:
無菌試驗:HIV(1,2)、HBV、HCV、EBV、細菌、支原體和真菌檢測為陰性。
冷凍復蘇測試結(jié)果:>50% 細胞活性,>25%的附著性,具有生長匯合性,保持原始的細胞形態(tài)。
分析證明:請詢要
使用限制:這些細胞只能做研究使用。不能人用,也不能以商業(yè)的目的使用。獲得該細胞株后,用戶確保正確使用和操作。
技術(shù)支持:請聯(lián)系上海健耕醫(yī)藥有限公司(郵箱:helps@genext.com.cn 或者熱線電話:400-6988-806)。
參考:
Helboe L, Egebjerg J, Møller M, Thomsen C. 2003. Distribution and pharmacology of alanine-serine-cysteine transporter 1 (asc-1) in rodent brain. Eur J Neurosci. Oct;18(8):2227-38.
West, M.D., Sargent, R.G., Long, J., Brown, C., Chu, J-S., Kessler, S., Derugin, N., Sampathkumar, J., Burrows, C., Vaziri, H., Williams, R., Chapman, K.B., Larocca, D., Loring, J.F., and Murai, J. 2008. The ACTCellerate Initiative: large-scale combinatorial cloning of novel human embryonic stem cell derivatives. Reg. Med. 3(3): 287-308.
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