伯樂(lè)CFX Duet熒光定量PCR儀主要功能用途
Bio-Rad CFX Duet實(shí)時(shí)熒光定量PCR是2022年5月新上市的小型經(jīng)濟(jì)型雙色qPCR系統(tǒng)，秉承CFX Opus系統(tǒng)的強(qiáng)大溫控性能、精準(zhǔn)光梭檢測(cè)系統(tǒng)，具有單重singleplex或雙重?zé)晒舛�量PCR檢測(cè)(duplex assays)功能。適用于基因表達(dá)分析、基因分型(Genotyping)、靶序列定量和蛋白質(zhì)熱移檢測(cè)(Protein thermal shift assays)等多樣化研究應(yīng)用。主要應(yīng)用包括:
1、基因表達(dá)水平定量分析
在生理、病理、環(huán)境脅迫以及SiRNA誘導(dǎo)基因沉默和基因敲除后動(dòng)植物組織細(xì)胞及微生物特定基因表達(dá)水平的檢測(cè)。
2、基因突變的檢測(cè)
常用于SNP基因型分析(SNPgenotyping)和拷貝數(shù)變異(Copy number variation,CNV)檢測(cè)。
3、病原體檢測(cè)(Pathogen detection)
用于臨床醫(yī)學(xué)上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病，以及畜牧業(yè)、農(nóng)作物病蟲害的病原體的檢測(cè)確認(rèn)、感染嚴(yán)重程度的量化評(píng)估。
4、高分辨率溶解曲線分析(High resolution melt,HRM)
高分辨熔解曲線(high-resolution melt，HRM)分析是通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料釋放的綠色熒光強(qiáng)度的變化，了解 PCR產(chǎn)物中DNA分子的解鏈溫度情況，分析樣品特定基因片段DNA組成變化。
5、miRNA表達(dá)水平的檢測(cè)
基于miRNA與特定靶基因mRNA表達(dá)水平變化間的關(guān)聯(lián)，研究miRNA調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制。
6、藥物研究
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用藥理作用分子機(jī)制分析、藥物作用靶點(diǎn)分析、耐藥基因檢測(cè)以及藥代動(dòng)力學(xué)相關(guān)基因的多態(tài)性研究。
7、蛋白熱漂移實(shí)驗(yàn)(Thermal shift assay,TSA)
蛋白質(zhì)與配體的復(fù)合物在加熱過(guò)程會(huì)導(dǎo)蛋白質(zhì)變性、熔解和復(fù)合物的解離，導(dǎo)致蛋白折疊結(jié)構(gòu)中的疏水基團(tuán)暴露。暴露疏水基團(tuán)與測(cè)試添加的熒光染料 SYPRO Orange相結(jié)合，而提高熒光染料的發(fā)射強(qiáng)度。借助于實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的溶解曲線分析功能，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中蛋白熒光強(qiáng)度，生成蛋白-配體復(fù)合物的熒光-溫度曲線圖。據(jù)此。測(cè)定蛋白質(zhì)在不同環(huán)境下熱變性溫度的變化，檢測(cè)小分子與目標(biāo)蛋白的結(jié)合，評(píng)估候選藥物和蛋白可能的配體大規(guī)模篩選。
性能特點(diǎn)
伯樂(lè)CFX Duet實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀秉承CFXOpus96qPCR系統(tǒng)的蜂巢式樣品模塊和樣品溫度梯度控制技術(shù)(可編程溫度梯度，可快速確定最佳退火溫度annealing temperatures)、新型推拉熱蓋和光梭式精準(zhǔn)檢測(cè)模塊，消除了不同樣品孔熒光信號(hào)光程誤差和孔間熒光信號(hào)竄擾，無(wú)須使用ROX校正。全新CFX Maestro Software整合聯(lián)機(jī)控制和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析功能，一鍵式數(shù)據(jù)收集、數(shù)據(jù)分析和導(dǎo)出。
1、雙重?zé)晒鈾z測(cè)
CFX Duet實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)，采用雙通道光學(xué)元件，并在出廠前預(yù)先針對(duì)SYBR Green等常見染料進(jìn)行了校準(zhǔn)，允許在基因分型和多基因表達(dá)分析中定量多達(dá)兩個(gè)靶標(biāo)。
2、CFX Maestro軟件整合聯(lián)機(jī)控制和數(shù)據(jù)分析功能
CFX Duet通過(guò)USB 端口與計(jì)算機(jī)聯(lián)機(jī)，采用CFXMaestro軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)置和分析，并提供自定義報(bào)告，而無(wú)需將數(shù)據(jù)導(dǎo)出到其他程序。整合PrimePCR Assays，設(shè)計(jì)和驗(yàn)證的PrimePCR引物;具有包括t-檢驗(yàn)、方差分析在內(nèi)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析模塊;
提供中文CFX Maestro Software和安全版本CFX Maestro Security Edition Software。CFX Maestro 安全版軟件提供和CFX Maestro軟件一樣的功能，提供審計(jì)和電子簽名(Audit and e-signature)安全環(huán)境，符合美國(guó)FDA21CFR Part11法規(guī)。
 

CFX Duet技術(shù)參數(shù)：

樣本槽類型：固定

樣本通量：96孔

反應(yīng)體積：1–50 µL(推薦10–50 µL)

尺寸(WxDxH)：33x56x36 cm (13 x 22 x 14 in.)

重量：22 kg(48lb)

通訊：USB 2.0及以上

電子認(rèn)證：IEC,CE

操作系統(tǒng)

激發(fā)光源：3個(gè)帶濾光片的LEDs

熒光檢測(cè)：3個(gè)帶濾光片的光敏二極管

激發(fā)光/發(fā)射光波長(zhǎng)：450–580 nm

掃描時(shí)間

所有通道：12sec

單通道：3sec

動(dòng)態(tài)范圍：10個(gè)數(shù)量級(jí)

靈敏度：1拷貝人基因組 DNA

多重檢測(cè)：每孔2靶標(biāo)

96孔反應(yīng)模塊

加熱和制冷技術(shù)：Peltier

熱蓋溫控范圍：30–110ºC

溫控范圍：4–100ºC

最大升降溫速率：5ºC/sec

平均升降溫速率：3.3ºC/sec

溫控準(zhǔn)確性：±0.2ºC

溫控均一性：±0.3ºC,達(dá)到設(shè)定溫度后10s內(nèi)

溫度梯度

可操作溫度范圍：30–100ºC

溫差范圍：1–24ºC

CFX Maestro數(shù)據(jù)管理和分析軟件

操作系統(tǒng)：Windows 10 (64-bit)

內(nèi)存：最低 1 GB

數(shù)據(jù)分析模式：標(biāo)準(zhǔn)曲線絕對(duì)定量 溶解曲線分析 基因表達(dá)分析：相對(duì)定量 (∆Cq) 或均一化表達(dá)(∆∆Cq) 無(wú)限量數(shù)據(jù)文件合并分析 等位基因分析 終點(diǎn)法分析 數(shù)據(jù)分析選項(xiàng)：柱狀圖、箱線圖、點(diǎn)狀圖、聚類圖、散點(diǎn)圖和火山圖等 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：t-test 和方差分析 (ANOVA)

數(shù)據(jù)導(dǎo)出：鼠標(biāo)右鍵菜單可保存、復(fù)制和打印所有圖表和表單 多種格式導(dǎo)出特定數(shù)據(jù) 可復(fù)制粘貼到 Microsoft Excel, Word和PowerPoint 等文件中 自定義輸出報(bào)告包含實(shí)驗(yàn)設(shè)置、數(shù)據(jù)圖片和表格，可直接打印或保存為 PDFs 導(dǎo)出為RDML

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