QuickShuttle系列轉(zhuǎn)染試劑說明書

產(chǎn)品描述

QuickShuttle系列轉(zhuǎn)染試劑是一類具有自主知識產(chǎn)權、獨特配方的陽離子型轉(zhuǎn)染試劑，具有高效、低毒和易于使用等優(yōu)點，推薦用于常規(guī)哺乳動物細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建。QuickShuttle區(qū)別于常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑的兩個最主要特點是：（1）可以在貼壁細胞傳代后尚未貼壁時立即進行轉(zhuǎn)染（立傳立轉(zhuǎn)）；（2）轉(zhuǎn)染操作可在一分鐘內(nèi)完成。

重要提示

1. 與常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑不同，使用QuickShuttle可在貼壁細胞傳代后尚未貼壁時直接進行轉(zhuǎn)染（立傳立轉(zhuǎn)），從而可節(jié)省18~24小時的轉(zhuǎn)染前細胞培養(yǎng)時間。

2. QuickShuttle極大簡化了轉(zhuǎn)染操作，轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒混合后無需室溫靜置孵育，可直接加入含血清的細胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染，而且無需在轉(zhuǎn)染后補加血清或更換培養(yǎng)基，整個轉(zhuǎn)染操作可在一分鐘內(nèi)完成。

3. 立傳立轉(zhuǎn)、一分鐘完成轉(zhuǎn)染操作和高轉(zhuǎn)染效率等優(yōu)點使得部分使用QuickShuttle的轉(zhuǎn)染實驗可在細胞傳代后24小時內(nèi)完成，從而比常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑節(jié)約24~48小時。

4. 以24孔細胞板轉(zhuǎn)染實驗為例，推薦一次（即每孔）轉(zhuǎn)染的低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為1~2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為3~5µl（請在正式實驗前根據(jù)不同細胞和不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化），質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑可用無菌生理鹽水稀釋。

5. QuickShuttle經(jīng)過DMEM、RPMI-1640和M199等常規(guī)培養(yǎng)基測試，雖然在實驗中推薦使用DMEM，但有實驗結果表明M199能夠顯著增強QuickShuttle對Vero細胞和293FT細胞的轉(zhuǎn)染效果，因此可嘗試使用不同培養(yǎng)基對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化。

6. QuickShuttle設計用于常規(guī)哺乳動物細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建，不推薦但可嘗試用于哺乳動物原代細胞和二倍體細胞的轉(zhuǎn)染。

7. QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑建議常溫運輸，2~8ºC保存（在-30 ºC到室溫范圍內(nèi)均可長時間穩(wěn)定保存），無菌取用，有效期18個月。

名稱：QuickShuttle-BHK-21

 (BHK-21細胞專用QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑)

貨號：KX0110046

含量：0.8 ml

用途：用于BHK-21細胞的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構建（立傳立轉(zhuǎn)）。

注意事項：

1. 質(zhì)粒DNA：請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。

2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。

3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過DMEM、RPMI-1640和M199等常規(guī)培養(yǎng)基測試，推薦使用含5~10%牛血清的DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。

4. 以24孔細胞板轉(zhuǎn)染實驗為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為3~5µl，請在正式實驗前根據(jù)不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化。

5. 立傳立轉(zhuǎn)要求使用生長旺盛的細胞，即細胞生長至80-90%成片或剛長滿。若使用生長過老的細胞，將明顯影響立傳立轉(zhuǎn)的效率。

使用方法

1. 將新鮮消化的BHK-21細胞接種到24孔細胞板中，每孔1~2x105細胞，1ml完全培養(yǎng)基。備注：可在生長旺盛的細胞傳代后直接按下述步驟2~5進行轉(zhuǎn)染，無需18~24小時的等候時間。

2. 將2μg質(zhì)粒DNA和3~5μl轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到50μl生理鹽水中。備注：質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的最適用量需要根據(jù)不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出1~2µg和3~5µl范圍。

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的10~30分鐘的等候時間。

4. 將上述復合物直接加入到細胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。備注：轉(zhuǎn)染復合物可直接加入含血清的細胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染。

5. 將細胞板移至37ºC/5% CO2孵箱中進行培養(yǎng)。備注：無需在轉(zhuǎn)染后4~6小時補加血清或更換培養(yǎng)基。

24~72小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。