定點(diǎn)突變是一種廣泛應(yīng)用的分析蛋白和DNA的非常有力的工具。普通的定點(diǎn)突變?cè)噭┖型ǔJ腔诜聪?/SPAN>PCR技術(shù),采用高保真耐熱DNA聚合酶和互補(bǔ)的突變引物向目的基因引入單個(gè)堿基或多個(gè)鄰近堿基的突變、缺失、或插入。當(dāng)遇到多個(gè)位點(diǎn)突變的需求時(shí),利用單點(diǎn)突變?cè)噭┖兄荒軐?duì)目標(biāo)位點(diǎn)逐一引入突變,耗時(shí)費(fèi)力。
StarMut Multi Site-directed Mutagenesis (MSDM)Kit突破了傳統(tǒng)的定點(diǎn)突變方法,只需要一步PCR反應(yīng),即可引入多個(gè)目標(biāo)突變,操作簡(jiǎn)單快捷,突變陽(yáng)性率高。該試劑盒針對(duì)單個(gè)目標(biāo)突變只采用一條磷酸化的突變引物,利用StarMut MSDM Enzyme的耐熱DNA聚合酶活性合成與模板互補(bǔ)的帶有突變的的DNA鏈,然后通過(guò)該酶的連接酶活性修復(fù)突變DNA鏈之間的缺刻(nicks),使其連接成為一條與模板互補(bǔ)的突變單鏈DNA。經(jīng)過(guò)多個(gè)PCR循環(huán)反應(yīng)后,帶有多個(gè)特定突變的DNA鏈成倍增長(zhǎng),經(jīng)過(guò)DpnI限制性內(nèi)切酶消化不含突變的質(zhì)粒模板,環(huán)化的單鏈突變DNA可直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化,通過(guò)DNA測(cè)序或限制性內(nèi)切酶消化等方法篩選出目標(biāo)突變質(zhì)粒。本試劑盒適用于≤6 kb質(zhì)粒的多點(diǎn)突變,根據(jù)質(zhì)粒性質(zhì)不同,最多可引入5個(gè)獨(dú)立位點(diǎn)的突變、插入或刪除。

用途
· 研究突變對(duì)蛋白功能或結(jié)構(gòu)的影響
· 蛋白藥物、基因工程酶的定向進(jìn)化
特點(diǎn)
· 高效快速:采用一步PCR法,同時(shí)引入多個(gè)突變位點(diǎn)
· 操作簡(jiǎn)便:不需要磷酸化引物,不需單獨(dú)的連接反應(yīng),不需要特殊菌株
產(chǎn)品組分
StarMut MSDM Enzyme 8 μl
10 x StarMut MSDM Buffer 100 μl
StarMut dNTPs 25 μl
Dpn I (10 U/ml) 12 μl
ddH2O 1 ml
保存條件
-20℃恒溫保存一年
使用方法
1. 設(shè)置PCR反應(yīng)體系:
Template Plasmid (5~10 ng/μl) 1 μl
10x StarMut MSDM Buffer 2.5 μl
Phosphorylated primers (20 μM) 2 μl
StarMut dNTPs 1 μl
ddH2O 補(bǔ)足至25 μl
2. 加入 1 μl StarMut MSDM Enzyme混勻,置于PCR儀中
3. 按以下設(shè)置進(jìn)行PCR:
4. 加入1 μl Dpn I,37℃溫育≥1 hr
5. 轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)
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北京康潤(rùn)誠(chéng)業(yè)生物科技有限公司是一家由具有資深企業(yè)管理經(jīng)驗(yàn)和生物技術(shù)背景的海外留學(xué)人員創(chuàng)辦的高新技術(shù)企業(yè)。公司旨在通過(guò)自主研發(fā),為生命科研人員提供優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定、簡(jiǎn)單易用、高性價(jià)比的生物科研試劑。公司目前推出的產(chǎn)品涉及核酸擴(kuò)增、核酸分離純化、基因克隆、蛋白質(zhì)檢測(cè)和純化、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。公司將繼續(xù)立足生物技術(shù)前沿領(lǐng)域,不斷推出質(zhì)量可靠、價(jià)格合理的新產(chǎn)品,為生命科研人員提供全方位、快速、高效的解決方案。
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