動物細胞/組織細胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

動物細胞/組織細胞色素C釋放凋亡檢測試劑是一種旨在從動物細胞或活體組織中分離出線粒體和細胞漿組分，從而檢測細胞色素C的轉運，即由線粒體釋放到細胞漿，來探測細胞凋亡的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體和細胞漿組分的制備。可以被用于后續(xù)蛋白質(zhì)西方雜交等實驗。產(chǎn)品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能穩(wěn)定，分離到位，質(zhì)量保證。

 

技術背景

 

細胞色素C（CYTOCHROME C）在細胞凋亡中扮演著重要作用。細胞色素C位于線粒體內(nèi)外膜之間。當細胞凋亡時，它從線粒體內(nèi)釋放到細胞漿里，引起一系列的信號通道的下游反應。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

YIJI 清理液（Reagent A）   毫升

YIJI 裂解液（Reagent B）   毫升

YIJI 凈化液（Reagent C）   毫升

YIJI 強化液（Reagent D）   毫升

YIJI 保存液（Reagent E）   毫升

YIJI 活性液（Reagent F）   微升

YIJI 溶解液（Reagent G）   毫升

YIJI 上樣液（Reagent H）   微升

產(chǎn)品說明書   1份

 

保存方式

 

保存YIJI凈化液（Reagent C）和YIJI 活性液（Reagent F）在-20℃冰箱里，避免反復凍融；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

 

用戶自備

 

HANK平衡鹽緩沖溶液（YJ12028）或PBS緩沖溶液（YJ12033）：用于清理細胞

硬組織處理液（Reagent I）：用于促進硬組織表面溶解

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（YJ12024）：用于細胞脫離

完全細胞培養(yǎng)液（YJ12052）：用于細胞培養(yǎng)所需的培養(yǎng)基

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

4℃（微型）臺式離心機：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細胞

抗細胞色素C抗體：用于蛋白質(zhì)西方雜交

 

實驗步驟

 

一、動物軟組織線粒體分離（組織勻漿法）

 

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI 活性液（Reagent F）凍融，然后移出xx微升YIJI 活性液（Reagent F）和 xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）到xx毫升的YIJI裂解液（Reagent B）里，混勻后，放進冰槽里，標記為YIJI 裂解工作液。然后進行下列操作。

 

• 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量（注意：實驗前最好使動物空腹12至24小時）
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI 清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用研磨棒勻化組織（約80下）（注意：參見注意事項5）
• 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心移取上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管――此步驟獲得細胞漿組分
• 即刻放進－70℃冰箱里備用
• 保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 溶解液（Reagent G）到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)
• 若暫時不予后續(xù)處理，即刻保存在－70℃冰箱里備用
• 繼續(xù)進行下列操作

 

操作一、可溶性線粒體和細胞漿總蛋白定量檢測

• 分別移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI －Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－YJ30030.1）

 

操作二、可溶性線粒體和細胞漿蛋白電泳

• 分別移取20微升（總量10微克）線粒體和細胞漿蛋白溶液（總量50微克）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI上樣液（Reagent H）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 煮沸5分鐘
• 上樣，進行電泳操作（12％SDS-PAGE）
• 使用1微克/毫升抗細胞色素C抗體進行西方雜交（注意：建議使用YIJI蛋白質(zhì)西方雜交印跡（化學發(fā)光）試劑盒 YJ30005.1）
• 比較細胞色素C的濃度變化和差異

 

二、動物軟組織線粒體分離（化學處理法）

 

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI 活性液（Reagent F）凍融，然后移出xx微升YIJI活性液（Reagent F）和 xx毫升YIJI凈化液（Reagent C）到xx毫升的YIJI裂解液（Reagent B）里，混勻后，放進冰槽里，標記為YIJI 裂解工作液。然后進行下列操作。

 

• 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量（注意：實驗前最好使動物空腹12至24小時）
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
• 加入預冷的xx微升YIJI強化液（Reagent D）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項6）
• 加入預冷的xx毫升YIJI 保存液（Reagent E），用手混勻
• 放入4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞
• 放入4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心移取上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管――此步驟獲得細胞漿組分
• 即刻放進－70℃冰箱里備用
• 保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 溶解液（Reagent G）到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)
• 若暫時不予后續(xù)處理，即刻保存在－70℃冰箱里備用
• 繼續(xù)進行下列操作

 

操作一、可溶性線粒體和細胞漿總蛋白定量檢測

• 分別移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－YJ30030.1）

 

操作二、可溶性線粒體和細胞漿蛋白電泳

• 分別移取20微升（總量10微克）線粒體和細胞漿蛋白溶液（總量50微克）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI上樣液（Reagent H）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 煮沸5分鐘
• 上樣，進行電泳操作（12％SDS-PAGE）
• 使用1微克/毫升抗細胞色素C抗體進行西方雜交（注意：建議使用YIJI蛋白質(zhì)西方雜交印跡（化學發(fā)光）試劑盒－YJ30005.1）
• 比較細胞色素C的濃度變化和差異

 

三、動物細胞線粒體分離（細胞勻漿法）

 

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI 活性液（Reagent F）凍融，然后移出xx微升YIJI活性液（Reagent F）和 xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）到xx毫升的YIJI 裂解液（Reagent B）里，混勻后，放進冰槽里，標記為YIJI 裂解工作液。然后進行下列操作。

 

• 準備5至10瓶75cm²細胞培養(yǎng)瓶的細胞（5 X 10⁷），直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面
• 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面，然后抽去
• 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養(yǎng)平面
• 放進37℃培養(yǎng)箱3分種
• 手擊振動培養(yǎng)瓶，使細胞脫落
• 分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液
• 合并移入到1個50毫升錐形離心管
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為200g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升預冷的YIJI 清理液（Reagent A），混勻細胞
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻細胞顆粒群
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用研磨棒勻化細胞（約80下）（注意：參見注意事項5）
• 將所有細胞勻漿物移入15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心移取上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管――此步驟獲得細胞漿組分
• 即刻放進－70℃冰箱里備用
• 保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 溶解液（Reagent G）到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)
• 若暫時不予后續(xù)處理，即刻保存在－70℃冰箱里備用
• 繼續(xù)進行下列操作

 

操作一、可溶性線粒體和細胞漿總蛋白定量檢測

• 分別移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI－Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－YJ30030.1）

 

操作二、可溶性線粒體和細胞漿蛋白電泳

• 分別移取20微升（總量10微克）線粒體和細胞漿蛋白溶液（總量50微克）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 上樣液（Reagent H）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 煮沸5分鐘
• 上樣，進行電泳操作（12％SDS-PAGE）
• 使用1微克/毫升抗細胞色素C抗體進行西方雜交（注意：建議使用YIJI蛋白質(zhì)西方雜交印跡（化學發(fā)光）試劑盒－YJ30005.1）
• 比較細胞色素C的濃度變化和差異

 

四、動物細胞線粒體分離（化學處理法）

 

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI 活性液（Reagent F）凍融，然后移出xx微升YIJI 活性液（Reagent F）和 xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）到xx毫升的YIJI 裂解液（Reagent B）里，混勻后，放進冰槽里，標記為  YIJI裂解工作液。然后進行下列操作。

 

• 準備5至10瓶75cm²細胞培養(yǎng)瓶的細胞（5 X 10⁷），直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面
• 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面，然后抽去
• 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養(yǎng)平面
• 放進37℃培養(yǎng)箱3分種
• 手擊振動培養(yǎng)瓶，使細胞脫落
• 分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液
• 合并移入到1個50毫升錐形離心管
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為200g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升預冷的YIJI清理液（Reagent A）
• 放入臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
• 加入預冷的xx微升YIJI 強化液（Reagent D）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項6）
• 加入預冷的xx毫升YIJI 保存液（Reagent E），用手混勻
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心移取上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管――此步驟獲得細胞漿組分
• 即刻放進－70℃冰箱里備用
• 保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 溶解液（Reagent G）到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)
• 若暫時不予后續(xù)處理，即刻保存在－70℃冰箱里備用
• 繼續(xù)進行下列操作

 

操作一、可溶性線粒體和細胞漿總蛋白定量檢測

• 分別移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI －Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－YJ30030.1）

 

操作二、可溶性線粒體和細胞漿蛋白電泳

• 分別移取20微升（總量10微克）線粒體和細胞漿蛋白溶液（總量50微克）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI上樣液（Reagent H）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進臺式微型離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 煮沸5分鐘
• 上樣，進行電泳操作（12％SDS-PAGE）
• 使用1微克/毫升抗細胞色素C抗體進行西方雜交（注意：建議使用YIJI蛋白質(zhì)西方雜交印跡（化學發(fā)光）試劑盒－YJ30005.1）
• 比較細胞色素C的濃度變化和差異

 

五、動物硬組織線粒體分離（組織勻漿法）

 

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI 活性液（Reagent F）凍融，然后移出xx微升YIJI 活性液（Reagent F）和 xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）到xx毫升的YIJI 裂解液（Reagent B）里，混勻后，放進冰槽里，標記為YIJI 裂解工作液。然后進行下列操作。

 

• 手術取出動物組織，并秤重以確定組織重量（注意：實驗前最好使動物空腹12至24小時）
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入適量的（xx克組織需要xx毫升）YIJI 清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI 硬組織處理液（Reagent I），充分混勻
• 放進冰槽里孵育3分鐘
• 放進4℃臺式離心機離心2分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的xx毫升YIJI 清理液（Reagent A）和xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C），充分混勻
• 放進4℃臺式離心機離心2分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的xx毫升YIJI  裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用研磨棒勻化組織（約80下）（注意：參見注意事項5）
• 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心移取上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管――此步驟獲得細胞漿組分
• 即刻放進－70℃冰箱里備用
• 保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 溶解液（Reagent G）到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)
• 若暫時不予后續(xù)處理，即刻保存在－70℃冰箱里備用
• 繼續(xù)進行下列操作

 

操作一、可溶性線粒體和細胞漿總蛋白定量檢測

• 分別移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI －Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－YJ30030.1）

 

操作二、可溶性線粒體和細胞漿蛋白電泳

• 分別移取20微升（總量10微克）線粒體和細胞漿蛋白溶液（總量50微克）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 上樣液（Reagent H）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 煮沸5分鐘
• 上樣，進行電泳操作（12％SDS-PAGE）
• 使用1微克/毫升抗細胞色素C抗體進行西方雜交（注意：建議使用YIJI 蛋白質(zhì)西方雜交印跡（化學發(fā)光）試劑盒－YJ30005.1）
• 比較細胞色素C的濃度變化和差異

 

 

 

六、動物硬組織線粒體分離（化學處理法）

 

實驗開始前，將試劑盒里的YIJI 活性液（Reagent F）凍融，然后移出xx微升YIJI 活性液（Reagent F）和 xx毫升YIJI 凈化液（Reagent C）到xx毫升的YIJI 裂解液（Reagent B）里，混勻后，放進冰槽里，標記為YIJI 裂解工作液。然后進行下列操作。

 

• 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量（注意：實驗前最好使動物空腹12至24小時）
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升YIJI 清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放入液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入預冷的xx毫升YIJI 硬組織處理液（Reagent I），充分混勻
• 放進冰槽里孵育3分鐘
• 放進4℃臺式離心機離心2分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的xx毫升YIJI 清理液（Reagent A）和2毫升 YIJI 凈化液（Reagent C），充分混勻
• 放進4℃臺式離心機離心2分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的xx毫升YIJI 裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
• 加入預冷的xx微升YIJI 強化液（Reagent D）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項6）
• 加入預冷的xx毫升YIJI 保存液（Reagent E），用手混勻
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 小心移取上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管――此步驟獲得細胞漿組分
• 即刻放進－70℃冰箱里備用
• 保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物
• 加入xx微升YIJI 溶解液（Reagent G）到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)
• 若暫時不予后續(xù)處理，即刻保存在－70℃冰箱里備用
• 繼續(xù)進行下列操作

 

 

操作一、可溶性線粒體和細胞漿總蛋白定量檢測

• 分別移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用YIJI －Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－YJ30030.1）

 

操作二、可溶性線粒體和細胞漿蛋白電泳

• 分別移取20微升（總量10微克）線粒體和細胞漿蛋白溶液（總量50微克）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 上樣液（Reagent H）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進臺式微型離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415R）
• 煮沸5分鐘
• 上樣，進行電泳操作（12％SDS-PAGE）
• 使用1微克/毫升抗細胞色素C抗體進行西方雜交（注意：建議使用YIJI 蛋白質(zhì)西方雜交印跡（化學發(fā)光）試劑盒－YJ30005.1）
• 比較細胞色素C的濃度變化和差異

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為10次操作（1克動物組織或5 X 10⁷細胞）
• 所有操作均須在4℃或以下狀態(tài)下進行
• 操作時，須戴手套
• 操作時，避免污染母液，尤其是YIJI 裂解液（Reagent B）和YIJI 保存液（Reagent E）
• 通常勻化次數(shù)為80下達到80％的細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度：完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加勻化次數(shù)
• 通常孵育5分鐘達到80％的細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度：完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數(shù)
• 對于難以裂解的細胞，例如HeLa細胞，采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術處理
• 5 X 10⁷細胞約1克重量
• 建議使用足夠的細胞量
• 建議嚴格控制操作時間
• 通常5 X 10⁷細胞或1克動物組織的線粒體含量為50微克線粒體蛋白
• 建議使用YIJI  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒（YJ30030.1）測定蛋白濃度
• 保存在－70℃冰箱里的蛋白樣品嚴格避免反復凍融
• 本公司提供系列細胞色素C試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶

 

使用承諾

 

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務。用戶收到貨后，應按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。