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轉(zhuǎn)基因大豆 GTS40-3-2 品系基因定性檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
YIJI 轉(zhuǎn)基因大豆 GTS40-3-2 品系基因定性檢測試劑是一種旨在根據(jù)品系特異性轉(zhuǎn)基因分子標志和內(nèi)
源性保守序列設計引物,針對種子、食品、飼料等樣本 DNA 進行 PCR 擴增,獲得特異性條帶,來識別或
定性鑒定其轉(zhuǎn)基因大豆成分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。
可以被用于各種種子、食品、飼料等大豆品系 GTS-40-3-2 的鑒定。可用于后續(xù)測序、載體克隆等實驗。產(chǎn)
品即到即用,性能穩(wěn)定,操作簡便,擴增特異。
技術(shù)背景
轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品(genetically modified organism;GMO)成為食品安全的重要問題,標記和監(jiān)測作為市場準入
的法律依據(jù)。目前至少有 40 多種轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物作為食品使用,其中大豆(soybean)是常見品種之一。由
美國孟山都(Monsanto)公司開發(fā)的品系 GTS-40-3-2,1996 年進入市場,其商標名稱為 RoundReady Soybean
(RRS),已經(jīng)有 100 多種品種(varieties)。品系 GTS-40-3-2 由花椰菜花葉病毒(cauliflower mosaic virus)
35S 啟動子(promoter)、矮牽牛(Petunia hybrida)的葉綠體轉(zhuǎn)運肽(chloroplast transit peptide;CTP)基
因和葉綠體轉(zhuǎn)運肽 4 前導序列(leader sequence)、抗草甘膦(glyphosate)基因 5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-
磷 酸 合成 酶基因 ( 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase ; EPSPS ) 根 癌農(nóng) 桿菌( Agrobacterium、
tumefaciens) 胭脂氨酸合酶(nopaline synthase;NOS)轉(zhuǎn)錄終止子等外源性基因元素構(gòu)成,通過 PV-GMGT04
載體轉(zhuǎn)化到大豆品種 A5403 而成。其中 CT4 EPSPS 基因,(1365 堿基,編碼 456 氨基酸),作為功能性抗
草甘膦基因,是品系 GTS-40-3-2 的分子標記。通過 CT4 EPSPS 基因交界片段和大豆內(nèi)源性凝集素(lectin)
基因的引物設計,擴增其特異產(chǎn)物,進行識別、定性、定量鑒定種子、食品、飼料等轉(zhuǎn)基因大豆成分。
產(chǎn)品內(nèi)容
YIJI 擴增液(Reagent A)
YIJI 品系引物液(Reagent B)
YIJI 補充液(Reagent C)
YIJI 大豆引物液(Reagent D)
產(chǎn)品說明書
微升
微升
毫升
微升
1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里;有效保證 6 月
用戶自備
PCR 級礦物油:用于封隔反應液
PCR 儀:用于樣品擴增
PCR 管或平板:用于 PCR 反應的容器
瓊脂糖凝膠電泳:用于擴增后電泳分析
1
實驗步驟
實驗開始前,從-20℃冰箱中取出試劑,放進冰槽里融化。然后進行下列操作:
1. 針對一個樣本,每次移出 xx 微升 YIJI 擴增液(Reagent A)到 PCR 管
2. 加入 xx 微升用戶自備的的待測 DNA 樣品(總量 100 至 200 納克)
3. 加入 xx 微升 YIJI 品系引物液(Reagent B)或 YIJI 大豆引物液(Reagent D)
4. 再加入 xx 微升 YIJI 補充液(Reagent C)(反應總量為 25 微升)
5. 即刻放進微型臺式離心機瞬時離心 5 秒,速度為 500g(或 2000RPM;例如 eppendorf 5415)
6. (選擇步驟)加入 50 微升用戶自備的 PCR 級礦物油(注意:參見注意事項 9)
7. 即刻進行熱啟動 PCR 反應:
溫度(℃)
95
95
60
70
70
時間
2 分鐘
30 秒
30 秒
30 秒
5 分鐘
1
35 至 40
循環(huán)
1
8. 反應完畢后,移取 5 微升進行 1.8%瓊脂糖凝膠電泳:
片段大小
大豆內(nèi)源性基因產(chǎn)物
GTS-40-3-2 轉(zhuǎn)基因大豆基因產(chǎn)物
117 堿基
180 堿基
GeneID
K00821
AJ308514
9. 如果繼續(xù)測序鑒定,膠回收 PCR 產(chǎn)物(建議使用 YIJI 高質(zhì)純化膠回收試劑盒;GMS20007.2)
10.進行后續(xù)的測序反應
注意事項
1. 本產(chǎn)品為 20 次操作
2. 操作時,須戴手套
3. 建議使用帶濾芯的槍頭,避免污染
4. 在-20℃冰箱里儲存的產(chǎn)品避免反復凍融
5. 出現(xiàn)大豆擴增條帶:證明為大豆或含有大豆的樣品
6. 出現(xiàn)品系擴增條帶:證明為 GTS-40-3-2 轉(zhuǎn)基因大豆或含有轉(zhuǎn)基因成分的樣品
7. 可以將擴增產(chǎn)物純化后,克隆到質(zhì)粒中,然后進行測序
8. 如果需要測序,可以訂購測序引物
9. 根據(jù)用戶 PCR 儀的性能,決定是否加入礦物油(Mineral Oil)
10.本公司提供系列轉(zhuǎn)基因生物分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定