玉米蛋白分子生物學技術(zt):
分子生物學技術 真核細胞DNA的制備與定量|質粒DNA的堿裂解法提取與純化|λ噬菌體DNA提取|DNA分子的限制性內切酶消化|DNA片段回收與純化|目的基因的亞克隆|PCR|引物參數計算|PCR產物的克隆|DNA序列測定|Southern 雜交|PCR-SSCP|細胞凋亡|RNA操作中的一般要求|RNA的制備|mRNA的分離與純化|RT-PCR|Northern Blot|RPA|ddPCR|原位雜交|原核表達|蛋白SDS電泳|Western|表達蛋白的分離與純化|表達蛋白的生物學活性的檢測|真核轉染。
玉米蛋白試劑準備:
1.TE: 10mM Tris-HCl (pH 7.8); 1mM EDTA (pH 8.0)。
2.TBS: 25mM Tris-HCl (pH 7.4); 200mM NaCl; 5mM KCl。
3.裂解緩沖液:250mM SDS; 使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。
4.20% SDS
5.2mg/ml蛋白酶K
6.Tris飽和酚(pH 8.0)、酚/氯仿(酚∶氯仿=1∶1)、氯仿
7.無水乙醇、75%乙醇
玉米蛋白注意事項:
1. 所有用品均需要高溫高壓,以滅活殘余的DNA酶。
2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
3. 用大口滴管或吸頭操作,以盡量減少打斷DNA的可能性。
4. 用上述方法提取的DNA純度可以滿足一般實驗(如Southern 雜交、PCR等)目的。如要求更高,可參考有關資料進行DNA純化。
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