兔肌動蛋白分子生物學技術(zt):
分子生物學技術 真核細胞DNA的制備與定量|質粒DNA的堿裂解法提取與純化|λ噬菌體DNA提取|DNA分子的限制性內切酶消化|DNA片段回收與純化|目的基因的亞克隆|PCR|引物參數計算|PCR產物的克隆|DNA序列測定|Southern 雜交|PCR-SSCP|細胞凋亡|RNA操作中的一般要求|RNA的制備|mRNA的分離與純化|RT-PCR|Northern Blot|RPA|ddPCR|原位雜交|原核表達|蛋白SDS電泳|Western|表達蛋白的分離與純化|表達蛋白的生物學活性的檢測|真核轉染。
兔肌動蛋白試劑準備:
1.TE: 10mM Tris-HCl (pH 7.8); 1mM EDTA (pH 8.0)。
2.TBS: 25mM Tris-HCl (pH 7.4); 200mM NaCl; 5mM KCl。
3.裂解緩沖液:250mM SDS; 使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。
4.20% SDS
5.2mg/ml蛋白酶K
6.Tris飽和酚(pH 8.0)、酚/氯仿(酚∶氯仿=1∶1)、氯仿
7.無水乙醇、75%乙醇
兔肌動蛋白注意事項:
1. 所有用品均需要高溫高壓,以滅活殘余的DNA酶。
2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
3. 用大口滴管或吸頭操作,以盡量減少打斷DNA的可能性。
4. 用上述方法提取的DNA純度可以滿足一般實驗(如Southern 雜交、PCR等)目的。如要求更高,可參考有關資料進行DNA純化。
兔肌動蛋白相關試劑、蛋白及分子生物展示:XY131160異硫氰酸熒光素標記山羊抗小鼠IgG0.1mgXY131161山羊抗小鼠IgG,藻紅蛋白標記0.1mgXY100841β-巰基乙醇1.5mLXY100881SDS溶液(10%,電泳級)100mLXY90311電泳級Tricine干粉100gXY111007MALDI蛋白樣品處理試劑盒500次
工具酶
XY51206Taq DNA聚合酶500U|5000UXY120401熱啟動Taq DNA聚合酶100UXY130606抗干擾Taq DNA 聚合酶100次XY130910Long-Taq DNA聚合酶500UXY90501Tth DNA聚合酶250UXY51207Pfu DNA聚合酶100UXY130429Phusion DNA聚合酶250UXY101002KOD DNA聚合酶250UXY131037Tfl DNA聚合酶100UXY130430E.coli DNA聚合酶 Ι500UXY100937φ29 DNA聚合酶250UXY120411T4 DNA 聚合酶50UXY130618T7 DNA 聚合酶(未修飾)300UXY130602Vent DNA 聚合酶100UXY131195Deep Vent DNA 聚合酶100UXY131182Sulfolobus DNA 聚合酶 IV100UXY130612Bst DNA 聚合酶,全長500UXY100209Bst DNA聚合酶,大片段800U