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β-瓊脂糖酶分子生物學(xué)技術(shù)(zt):
分子生物學(xué)技術(shù) 真核細(xì)胞DNA的制備與定量|質(zhì)粒DNA的堿裂解法提取與純化|λ噬菌體DNA提取|DNA分子的限制性內(nèi)切酶消化|DNA片段回收與純化|目的基因的亞克隆|PCR|引物參數(shù)計(jì)算|PCR產(chǎn)物的克隆|DNA序列測(cè)定|Southern 雜交|PCR-SSCP|細(xì)胞凋亡|RNA操作中的一般要求|RNA的制備|mRNA的分離與純化|RT-PCR|Northern Blot|RPA|ddPCR|原位雜交|原核表達(dá)|蛋白SDS電泳|Western|表達(dá)蛋白的分離與純化|表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性的檢測(cè)|真核轉(zhuǎn)染。
β-瓊脂糖酶試劑準(zhǔn)備:
1.TE: 10mM Tris-HCl (pH 7.8); 1mM EDTA (pH 8.0)。
2.TBS: 25mM Tris-HCl (pH 7.4); 200mM NaCl; 5mM KCl。
3.裂解緩沖液:250mM SDS; 使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。
4.20% SDS
5.2mg/ml蛋白酶K
6.Tris飽和酚(pH 8.0)、酚/氯仿(酚∶氯仿=1∶1)、氯仿
7.無(wú)水乙醇、75%乙醇
β-瓊脂糖酶注意事項(xiàng):
1. 所有用品均需要高溫高壓,以滅活殘余的DNA酶。
2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
3. 用大口滴管或吸頭操作,以盡量減少打斷DNA的可能性。
4. 用上述方法提取的DNA純度可以滿足一般實(shí)驗(yàn)(如Southern 雜交、PCR等)目的。如要求更高,可參考有關(guān)資料進(jìn)行DNA純化。
β-瓊脂糖酶相關(guān)試劑、蛋白及分子生物展示:XY120506T4聚核苷酸激酶200UXY130655熱敏磷酸酶500UXY130552堿性磷酸酶,偶聯(lián)級(jí)500UXY131125辣根過(guò)氧化物酶,偶聯(lián)級(jí)100mgXY120405堿性磷酸酶,大腸桿菌25UXY120404堿性磷酸酶,牛小腸500UXY120403蝦堿性磷酸酶300UXY130657無(wú)機(jī)焦磷酸酶,熱穩(wěn)定250UXY130658無(wú)機(jī)焦磷酸酶 (酵母)10UXY130659三磷酸腺苷雙磷酸酶10000milliUXY130660ATP硫酸化酶10UXY120419大腸桿菌DNA連接酶1000UXY60609T4 DNA連接酶200UXY130621Taq DNA 連接酶1000UXY1306249°N DNA 連接酶2500UXY120421T4 RNA連接酶1000UXY130622T4 RNA連接酶 11000UXY130855T4 RNA 連接酶 2 (雙鏈RNA連接酶 )150UXY130856T4 RNA 連接酶 2(截短型 )2000UXY130857T4 RNA 連接酶 2 (截短型 K227Q)2000UXY120510ATP依賴的Dnase200UXY131230DNase I干粉100mgXY130984DNase I溶液1.5mLXY90205RNase A干粉100mg|500mgXY3160RNase A溶液1.5mL