純化線粒體凍存液（生物能量保護(hù)）產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

純化線粒體凍存液（生物能量保護(hù)）是一種旨在幫助冷凍環(huán)境下儲存各種分離的純化線粒體（人體和動物等），確保其膜完整性、維持新鮮狀態(tài)的超微結(jié)構(gòu)和生物能量學(xué)功能的保護(hù)性介質(zhì)。該溶液經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，無病毒和支原體，維護(hù)線粒體活力高達(dá)95％以上。

技術(shù)背景

凍存保護(hù)（Cryopreservation）是長期儲藏和保存生物活體材料的基本手段。但是，在凍存過程中活體將受到物理或化學(xué)性傷害諸如冰結(jié)晶體的形成、滲透壓的變化以及化學(xué)物毒性等，尤其是致命性的活體內(nèi)冰產(chǎn)生，所導(dǎo)致牽延和縮水等物理性損傷。作為凍存保護(hù)劑之一的二甲亞砜（dimethyl sulfoxide）被證實能夠阻止冰晶體的發(fā)生。在線粒體保存中，維護(hù)膜完整性、維持新鮮狀態(tài)下的超微結(jié)構(gòu)和生物能量學(xué)功能達(dá)到90％以上，包括耗氧（oxygen consumption）、呼吸控制比（Respiratory Control Ratio；RCR）等。 

產(chǎn)品內(nèi)容

凍存液（Reagent A）  50毫升

產(chǎn)品說明書           1份

保存方式

保存凍存液（Reagent A）在－20℃的冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于線粒體收集后離心

4℃微型臺式離心機：用于沉淀線粒體

2毫升凍存管：用于線粒體冷凍儲藏

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的凍存液（Reagent A）從－20℃的冰箱里取出，置于室溫下溶化。然后進(jìn)行下列操作。

• 將分離純化的500微升線粒體懸液（50毫克/毫升）移入到1.5毫升離心管
• 放進(jìn)4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入500微升凍存液（Reagent A）
• 輕輕混勻顆粒群
• 每分鐘降溫1度
• 1小時后，放進(jìn)－70℃的冰箱里保存
• 放進(jìn)37℃恒溫水槽復(fù)蘇凍融（注意：避免過長；一旦融化，即刻終止孵育）
• 放進(jìn)4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 進(jìn)行后續(xù)操作

注意事項

• 本產(chǎn)品為50毫升規(guī)格
• 所有凍存操作和使用工具均須在嚴(yán)格無菌狀態(tài)下進(jìn)行
• 操作時，避免污染母液
• 如果線粒體懸液容量低于100微升，可以直接加入凍存液（Reagent A）
• 凍存管線粒體凍存量可以達(dá)到每毫升50毫克
• 凍存和解凍的基本原則是冷凍速度緩慢（放進(jìn)保溫箱里后，再放進(jìn)－70℃冰箱里），解凍速度快速，這樣可以確保線粒體的質(zhì)量
• 本公司提供系列細(xì)胞及其相關(guān)凍存產(chǎn)品
    

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無病毒和支原體污染
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定維護(hù)線粒體活力高達(dá)90％以上