核糖核酸酶抑制劑（RNasin）產品說明書（中文版）

主要用途

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）是一種旨在快速有效和廣譜地抑制RNA酶活性的重要生物酶分子。廣泛運用在cDNA合成、逆轉錄PCR（RT-PCR）、微型RNA（miRNA）擴增、體外轉錄和翻譯、RNA測序的目標mRNA保護，以及原位雜交、抗體制備、mRNA定位等技術操作。產品即到即用，無核酶污染，性能穩定，抑制明顯。

技術背景

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）通過離子交換和親和層析技術從人胎盤中純化的分子量為50 kDa的天然蛋白質，純度達90％以上。該抑制劑以1：1非共價結合的方式與RNA酶快速形成復合物，在廣譜pH范圍內，非競爭性抑制RNA酶的活性，包括RNase A、B、C和人胎盤RNA酶，但不能抑制RNase T1、S1核酶、RNase H等。無核酸外切和內切以及RAN酶活性。在溫度高于50℃、高濃度尿素、SDS和其它去垢劑存在的情況下，復合物變性，導致抑制作用失效。

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）的單位定義為抑制50％的總量5納克RNase A活性所需的抑制劑量作為一個活性單位。

核糖核酸酶抑制劑（RNasin）的儲存緩沖成分包括20mM HEPES－KOH（pH 7.6），8 mM DTT，50mM KCl，50% Glycerol。

產品內容

抑制劑（Reagent A）（40單位/微升）     62.5微升

產品說明書       1份

保存方式

經常使用，保存在－20℃冰箱里；長期儲存，保存在－70℃冰箱里；避免反復凍融，有效保證6月

實驗提示

下列的反應體系為推薦使用，用戶可以按照自己的反應體系操作：

• 一次反應總量為20微升，其中分為兩步：

第一步：打開二級結構

依次加入下列建議使用的用量到0.5毫升PCR管里：

• 混勻，瞬時離心5秒
• 放進70℃干式恒溫儀，孵育3分鐘
• 即刻放進冰槽里
• 第二步：進行生成反應

繼續依次加入下列建議使用的用量到上述PCR管里

• 混勻，瞬時離心5秒
• （使用Oligo（dT）18或特定引物）放進42℃干式恒溫儀，孵育60分鐘

（使用Hexamer隨機引物）放進37℃干式恒溫儀，孵育60分鐘

• 放進70℃干式恒溫儀，孵育15分鐘
• 直接進行后續第二鏈合成
• 或加入80微升DEPC 水，混勻
• 移取2微升進行后續PCR擴增

注意事項

• 本產品為2500單位總量
• 避免反復凍融
• 使用前，混勻
• 建議使用量為每微升反應液1單位
• 建議整個操作在4℃下進行
• 建議使用潔凈的PCR管和帶有濾芯的槍頭，以免污染
• 根據用戶實際情況，調整用量
• 配制完成后，即刻進行合成反應，以確保反應物的活性
• 避免樣品中含有高濃度的尿素或SDS
• 本公司提供系列RNA逆轉錄試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶污染
• 本產品經鑒定抑制作用強