藻類細(xì)胞甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

藻類細(xì)胞甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑是一種旨在使用烷化劑甲磺酸乙酯飽和性誘導(dǎo)藻類細(xì)胞發(fā)生變異而產(chǎn)生基因功能缺失或獲得的突變株，成為細(xì)胞遺傳標(biāo)記和生理代謝特征篩選的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種藻類細(xì)胞包括藍(lán)藻、微藻等的誘導(dǎo)突變。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，突變頻率高。

技術(shù)背景

誘導(dǎo)突變（mutagenesis），包括物理（放射性）、化學(xué)、插入方法等，作為一種有效手段，用來確定和分析生物體的基因功能，即通過基因突變所產(chǎn)生的表型變異和生理反應(yīng)。甲磺酸乙酯（ethyl methanesulfonate；methanesulfonic acid ethyl ether；ethylmesylate；EMS）是一種化學(xué)誘變致畸的烷化劑（alkylating agent）。通過導(dǎo)致錯配和堿基變異，即C/G替換成T/A，產(chǎn)生同一基因上或基因組上隨機(jī)多樣性突變位點(diǎn)，以此發(fā)現(xiàn)基因的功能缺失或功能獲得，以及特定氨基酸在蛋白質(zhì)中的功能所在（正向篩選）。同時進(jìn)一步分析其單核苷酸多態(tài)性與基因功能的關(guān)系（逆向篩選），從而了解藻類生長和代謝的生物學(xué)機(jī)制。

產(chǎn)品內(nèi)容

對照液（Reagent A）       2毫升

誘導(dǎo)液（Reagent B）   2毫升

中和液（Reagent C） 100毫升

產(chǎn)品說明書       1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

藻類細(xì)胞特定培養(yǎng)液：用于培養(yǎng)藻類細(xì)胞

50毫升錐形管：用于藻類細(xì)胞突變誘導(dǎo)的容器

搖床：用于細(xì)胞孵育

臺式離心機(jī)：用于收集細(xì)胞

超聲儀：用于分離細(xì)胞

瓊脂平板培養(yǎng)基：用于觀察藻類細(xì)胞群落

 實驗步驟

（一）誘導(dǎo)

• 準(zhǔn)備2個無菌的50毫升錐形離心管：1管為對照管，另1管為誘導(dǎo)管
• 分別加入50毫升用戶自備的藻類細(xì)胞特定培養(yǎng)液
• 分別接種用戶待測的藻類細(xì)胞（藍(lán)藻、金藻等）
• 放進(jìn)搖床（速度為200RPM），25℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育細(xì)胞，直至細(xì)胞生長到指數(shù)生長期，達(dá)2 X 10⁷細(xì)胞/毫升
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入50毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入12.5毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 每次移取2.5毫升細(xì)胞懸液到超聲處理管里，進(jìn)行100瓦超聲處理，功率20％，時間15秒
• 超聲完成，轉(zhuǎn)移到2個新的對應(yīng)編號的50毫升錐形離心管
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入50毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入20毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 加入200微升對照液（reagent A）到1號管，混勻
• 加入200微升誘導(dǎo)液（reagent B）到2號管，混勻
• 同時放進(jìn)搖床（速度為200RPM），25℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育90分鐘
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液

（二）篩選

• 加入10毫升中和液（Reagent C）到2號管，混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 分別加入20毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液到1號和2號管，混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入20毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 同時放進(jìn)搖床（速度為200RPM），48℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育30分鐘
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入3毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 同時放進(jìn)搖床（速度為200RPM），25℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育10小時
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 分別小心抽去上清液
• 分別加入1毫升用戶自備的新鮮培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 篩選處理如下：
  • 分別移取300微升細(xì)胞懸液在用戶自備的氯霉素（30倍濃度）或5－氟胞嘧啶（40倍濃度）瓊脂平板培養(yǎng)基上鋪板培養(yǎng)：25℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育48小時，或直至群落出現(xiàn)――表明誘導(dǎo)成功（比較對照組）
  • 分別移取300微升細(xì)胞懸液在用戶自備的特殊瓊脂平板培養(yǎng)基上鋪板培養(yǎng)：25℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育48小時，或直至群落出現(xiàn)――觀察特異表型變異（比較對照組）
  • 分別移取300微升細(xì)胞懸液在用戶自備的一般瓊脂平板培養(yǎng)基上鋪板培養(yǎng)：25℃溫度條件，在直接光照（強(qiáng)度5000 lx）下，孵育48小時，或直至群落出現(xiàn)――觀察色澤白化變化（比較對照組）
  • 分別移取50微升細(xì)胞懸液在載玻片上（或進(jìn)行染色），置于顯微鏡下——觀察鞭毛變化（比較對照組）

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次操作規(guī)格
• 操作時，須戴手套；嚴(yán)格注意操作安全
• 操作時，須無菌操作
• 甲磺酸乙酯為有毒揮發(fā)性致畸劑，因此所有接觸過的器皿和用品都要使用0.1 M硫代硫酸鈉（Sodium Thiosulfate ；Na₂S₂O₃）沖洗或中和。溶液里須加入終濃度為0.1M硫代硫酸鈉，在室溫下孵育至少10分鐘，然后廢棄處理掉；建議使用-1.0 M 硫代硫酸鈉溶液－12043
• 用戶根據(jù)待測藻類細(xì)胞的特點(diǎn)，使用相應(yīng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，包括光照強(qiáng)度、培養(yǎng)溫度等
• 用戶根據(jù)需求，篩選出特殊生理、生化、或代謝型突變株
• 本公司提供系列甲磺酸乙脂誘導(dǎo)突變試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定誘導(dǎo)突變頻率高